JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 2:36 Min. • April 30th, 2023
Bei der orthotopen intramukösalen Inokulation werden Tumorzellen, die dem Histotyp des Schleimhautgewebes entsprechen, in das Schleimhautgewebe eines Empfängertieres abgegeben.
Zu Beginn fesseln Sie eine betäubte Maus am Hals auf einer chirurgischen Plattform, um den Zugang zu ihrem Mund zu erleichtern.
Bereiten Sie eine Suspension von hochmetastasierenden Krebszellen in einer gekühlten Basalmembranmatrix in einer Spritze vor. Die niedrige Temperatur verhindert, dass sich die Suspension verfestigt.
Injizieren Sie diese Suspension vorsichtig in die innere Wange oder den bukkalen Bereich der Maus. Die bukkale Region wird von der bukkalen Schleimhaut ausgekleidet, die von einem Netzwerk aus Blut- und Lymphgefäßen umgeben ist.
Stellen Sie sicher, dass die Krebszellsuspension vollständig abgegeben wird, und ziehen Sie die Nadel vorsichtig zurück. Lassen Sie die Matrix sich verfestigen und betten Sie die Zellen darin ein.
Lassen Sie die Maus wiederherstellen. Innerhalb weniger Tage nach der Injektion entwickelt sich an der Injektionsstelle ein Primärtumor. Schließlich können die Zellen aus diesem Tumor mit hohem Metastasierungspotenzial durch das Lymphsystem wandern und in die Lymphknoten extravasieren.
Diese Krebszellen passen sich an ihre neue Mikroumgebung an, vermehren sich und etablieren metastasierende Kolonien in den Lymphknoten.
Unmittelbar vor der Injektion mischen Sie die Zellen in einem Verhältnis von 1 zu 1 Tumorzellsuspension zu Basalmembranmatrix auf Eis. Laden Sie eine 0,5-Milliliter-Spritze mit einer 23G-Nadel mit 100 Mikrolitern Zellen pro Empfängertier. Legen Sie die Spritzen auf Eis und bestätigen Sie, dass eine betäubte Maus nicht auf das Einklemmen der Zehen reagiert.
Führen Sie anschließend die Nadel durch den verfügbaren offenen Raum auf beiden Seiten des Mundes in den rechten oder linken bukkalen Bereich ein, wobei Sie die Spritze parallel zur bukkalen Region halten, während sie sich in der Mundhöhle befindet, um die Injektion des vollen 100-Mikroliter-Volumens der Zell-Basalmembran-Matrix-Suspension über einen Zeitraum von 5 Sekunden zu erleichtern. Halten Sie die Spritze weitere 5 Sekunden an Ort und Stelle, um sicherzustellen, dass das gesamte Material injiziert wurde, bevor Sie die Spritze vorsichtig herausziehen. Die Tumore werden in etwa einer Woche grob sichtbar sein.