Gewinnung von DRG aus der Wirbelsäule der Ratte: Ein Verfahren zur Extraktion des dorsalen Wurzelganglions aus der Wirbelsäule eines Rattenmodells

Die Spinalganglien oder DRG sind Ansammlungen von Zellkörpern sensorischer Neuronen, die in den Wirbeln auf beiden Seiten des Rückenmarks untergebracht sind. Ihre Hauptfunktion besteht darin, sensorische neuronale Signale vom peripheren Nervensystem an das zentrale Nervensystem zu übertragen.

Um die Spinalganglien zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme eines frisch geernteten Rattenstachels. Präparieren Sie die Wirbelsäule, um die Hals-, Brust- und Lendenwirbelsäule zu trennen. Bewahren Sie die Wirbelsäulenabschnitte in einem geeigneten Puffer auf, um die Hydratation des Gewebes zu gewährleisten.

Positionieren Sie nun den Brustbereich mit der Rückenseite nach oben. Teilen Sie den Abschnitt in zwei seitliche Hälften. Befestigen Sie als Nächstes die präparierte Hälfte des Wirbelsäulensegments mit der medialen Seite nach oben. Löse das halbierte Rückenmark - eine lange, röhrenförmige Struktur - vorsichtig von den segmentierten Wirbelknochen des Abschnitts, um das darunter liegende DRG freizulegen.

Die DRG erscheinen als deutliche weiße Massen mit dorsalen und ventralen Wurzeln, die in den Spinalkanal eingebettet sind. Ziehen Sie das DRG vorsichtig mit einer feinen Zange heraus, um es aus dem Wirbelkanal zu lösen. Abschließend wird das geerntete DRG in ein geeignetes Medium für weitere nachgelagerte Anwendungen überführt.

Reinigen Sie die Rückenhaut einer euthanasierten Ratte mit 70% Ethanol und entfernen Sie die Wirbelsäule mit einer Schere. Trennen Sie die Hals-, Brust- und Lendenwirbelsäule und legen Sie die Wirbelsäulenabschnitte in eine 10-Zentimeter-Kulturschale mit PBS, um die Gewebeproben mit Feuchtigkeit zu versorgen.

Öffnen Sie mit einer feinen Knochenschere die Brust- und Halswirbelknochen in der dorsalen und ventralen Hinsicht, um die Wirbelsäule in zwei seitliche Hälften zu teilen, und legen Sie die Gewebeabschnitte in eine saubere 10-Zentimeter-Schale mit frischem PBS. Löse das Rückenmark vorsichtig mit einer Pinzette von den Wirbelknochen, um die Spinalganglien sichtbar zu machen.

Legen Sie die Spitzen einer feinen Pinzette, die unter jedes Ganglion gehalten wird, greifen Sie das Gewebe und ziehen Sie es aus der Knochenhöhle, in der es steckt. Unmittelbar nach der Entnahme wird jedes Ganglion in ein DMEM-Kulturmedium gelegt, das mit 2 % Penicillin und Streptomycin oder Pen/Strep und 10 % fetalem Rinderserum oder FBS ergänzt wird, um eine bakterielle Kontamination des Nervengewebes zu verhindern.