Ernte der Chorioallantoismembran von Küken: Eine Methode zur Isolierung einer tumortransplantattragenden chorioallantoischen Membran aus Hühnerei

Die chorioallantoische Membran oder CAM ist eine extraembryonale Membran, die eng an der inneren Schalenmembran einer intakten Eizelle haftet. CAM ist ein ideales System für die Tumorimplantation und -modellierung, da es sich um eine von Natur aus immundefiziente und stark vaskularisierte Membran handelt.

Um ein tumortragendes CAM zu entnehmen, nehmen Sie zunächst ein lebensfähiges befruchtetes Hühnerei mit einem voll entwickelten CAM, dem zuvor ein Tumor transplantiert wurde. Fügen Sie dem CAM Paraformaldehyd hinzu. Paraformaldehyd vernetzt die Membranproteine und macht die Membran steifer, um ihre Ernte zu erleichtern.

Schneiden Sie dann um das Ei herum, um den oberen Teil der Eierschale vom Rest des Eies zu trennen, wobei das tumortragende CAM noch an der entfernten Schale befestigt ist. Halten und heben Sie den CAM an einer Kante an, um ihn sanft von der Eierschale zu lösen.

Platzieren Sie danach das geerntete CAM in Paraformaldehyd mit dem Tumortransplantat nach oben. Paraformaldehyd bewahrt die Morphologie des CAM und des Tumortransplantats und bereitet so die geerntete Membran für verschiedene nachgelagerte Analysen vor.

Am Ende der Inkubation legen Sie die Eier auf die Labortischplatte. Verwenden Sie eine Spritze, um den Filmverband jedes Eies zu perforieren, und tragen Sie etwa 300 Mikroliter 4% Paraformaldehyd auf jede Chorioallantoismembran auf, um das Gewebe leicht zu versteifen und den Entnahmeprozess zu erleichtern.

Entfernen Sie mit einer Schere die obere Hälfte der Eierschale, an der die Chorioallantoismembran befestigt ist. Reduzieren Sie die Größe der Schale auf einen Durchmesser von etwa 3 Zentimetern und behalten Sie den Teil der Chorioallantoismembran, in dem das Spinalganglion und die Tumorzellen transplantiert wurden, in der Mitte des Schalenfragments bei. Fassen Sie dann die chorioallantoische Membran mit einer feinen Pinzette an und lösen Sie das Gewebe von der Eierschale, um es in eine Vertiefung einer 6-Well-Platte mit 2 Millilitern 4 % Paraformaldehyd pro Vertiefung zu übertragen.