JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 3:02 Min. • April 30th, 2023
Die orthotope Inokulation erleichtert die Abgabe von Krebszellen an ein Empfängertier an einem Organ oder einer Stelle, die dem Gewebehistotyp entspricht. Bereiten Sie zunächst eine anästhesierte, immungeschwächte Nacktmaus in Rückenlage vor.
Machen Sie als Nächstes einen chirurgischen Schnitt in der Halsregion, um die Speicheldrüsen freizulegen. Verschieben Sie die Speicheldrüsen und präparieren Sie die Gurtmuskulatur, um die darunter liegende Luftröhre und Schilddrüse freizulegen.
Die Schilddrüse, eine endokrine Drüse, besteht aus zwei Lappen, die zu beiden Seiten der Luftröhre liegen und den Krikoidknorpel umgeben. Diese beiden Lappen sind durch einen dünnen Streifen Schilddrüsengewebe verbunden, der als Isthmus bezeichnet wird.
Bereiten Sie nun eine Suspension von Schilddrüsenkrebszellen mit einem geeigneten Puffer in einer Spritze vor. Injizieren Sie die Zellsuspension vorsichtig in den Schilddrüsenlappen der Maus.
Positionieren Sie anschließend die Speicheldrüsen neu und vernähen Sie den Schnitt. Lassen Sie die Maus wiederherstellen. Überwachen Sie die Maus wöchentlich, um das Wachstum orthotoper Tumoren im Schilddrüsenlappen zu beobachten.
Für die Inokulation von orthotopen Schilddrüsentumorzellen suspendieren Sie ein Aliquot von Cal62-Zellen in 5 Mikrolitern PBS und injizieren Sie subkutan 100 Mikroliter Analgetikum und 100 Mikroliter Antibiotikum in eine 7 Wochen alte BALB/c-Nacktmaus. Nachdem Sie bestätigt haben, dass Sie nicht auf das Einklemmen der Zehen reagieren, legen Sie das Tier unter ein Präpariermikroskop und desinfizieren Sie den Hals des Tieres mit Jodopovidon.
Machen Sie als nächstes einen etwa 2 Zentimeter großen Schnitt in der Haut und verschieben Sie die Speicheldrüsen, um den Hals freizulegen. Verwenden Sie eine Präparierzange und/oder eine Schere, um die Gurtmuskulatur zu präparieren, um die Luftröhre und die Schilddrüse freizulegen, und injizieren Sie mit einer 10-Mikroliter-Spritze das 5-Mikroliter-Volumen der Tumorzellen in das rechte Schilddrüsenläppchen, das sich an der Seite des Zirikoidknorpels befindet.
Wenn alle Zellen abgegeben wurden, positionieren Sie die Speicheldrüsen neu und verwenden Sie seidengeflochtene, beschichtete, nicht resorbierbare Nähte, um den Schnitt zu schließen. Tragen Sie dann Jodopovidon auf den Wundbereich auf und legen Sie die Maus bis zur vollständigen Genesung auf eine thermische Decke mit Überwachung.