Einbettung von 3D-Sphäroiden in Agarose-Geltropfen: Eine Technik zur Konservierung von Sphäroiden für die nachgelagerte Analyse

Sphäroide sind dreidimensionale in vitro sphärische zelluläre Aggregate, die die in vivo Tumormikroumgebung nachahmen und helfen, die Tumorprogression zu untersuchen. Um diese Sphäroide durch Einbetten zu erhalten, beginnen Sie mit der Entnahme eines sterilen Röhrchens mit Sphäroiden in einem gewünschten Puffer.

Behandeln Sie die Sphäroide mit Paraformaldehyd. Paraformaldehyd vernetzt zelluläre Proteine, was zur Stabilisierung und Erhaltung der Zellstruktur führt. Die Sphäroide zentrifugieren und den paraformaldehydhaltigen Überstand entfernen. Suspendieren Sie das Sphäroid-Pellet im Puffer.

Bereiten Sie anschließend die gewünschte Konzentration der geschmolzenen Agarosegellösung vor. Machen Sie einen Agarose-Gel-Tropfen auf einen Objektträger. Halten Sie den Schieber auf einem Heizblock, um eine Verfestigung der Agarose zu vermeiden.

Sammeln Sie mit einer Mikropipette mit einer breiten Blende die Sphäroide aus dem Röhrchen. Pipettieren Sie die Sphäroide vorsichtig in die Mitte des Agarose-Geltropfens, ohne den Objektträger zu berühren. Anschließend wird der Objektträger bei einer geeigneten Temperatur inkubiert, damit sich das ECM verfestigen und die darin enthaltenen Sphäroide ei