Kryomahlen von dezellularisiertem Gewebe: eine Technik zur Gewinnung von feinem extrazellulärem Matrixpulver

Kryogenes Mahlen oder Kryomahlen ist eine Technik, die es ermöglicht, dezellularisierte Gewebeproben auf extrem niedrige Temperaturen abzukühlen und zu einem feinen Pulver zu mahlen, während ihre biochemische Zusammensetzung erhalten bleibt.

Zu Beginn erhalten Sie eine lyophilisierte, aus Gewebe gewonnene dezellularisierte extrazelluläre Matrix oder EZM von Interesse. Zerkleinern Sie es, um kleine Fragmente zu erhalten.

Anschließend werden die zerkleinerten ECM-Fragmente in einen Mahlbehälter überführt. Geben Sie die Mahlkugeln in den Mahlbehälter. Tauchen Sie das beladene Mahlglas in flüssigen Stickstoff, um die Probe bei -196 °C einzufrieren.

Laden Sie das abgekühlte Glas in ein Kryomahlsystem. Setzen Sie die gefrorene Probe für die gewünschte Dauer einer Kryomahlung mit einer angemessenen Häufigkeit aus.

Beim Kryomahlen oszilliert der Mahlbecher radial in der horizontalen Position. Die Trägheit der Mahlkugeln ermöglicht es ihnen, die gefrorene Probe mit hoher Energie an den abgerundeten Enden des Gefäßes zu beeinflussen und zu pulverisieren.

Darüber hinaus fördert die Bewegung des Mahlbechers in Verbindung mit der Bewegung der Mahlkugeln ein intensives Mischen der Probe, um ein feines Pulver mit gleichmäßiger Partikelgrößenverteilung zu erhalten.

Übertragen Sie nun das kryogemahlene ECM-Pulver in ein Glasfläschchen. Verschließen Sie die Durchstechflasche fest, um Feuchtigkeit zu vermeiden. Trocknen Sie die Probe bis zur weiteren Verwendung ein.

Verwenden Sie eine scharfe chirurgische Schere, um das dezellularisierte Gewebe fein zu zerkleinern. Um das verarbeitete Gewebe zu kryomillen, füllen Sie eine 25-Milliliter-Mahlkammer aus Edelstahl für ein Labor-Kugelmühlensystem mit zerkleinerter lyophilisierter ECM und fügen Sie zwei 10-Millimeter-Mahlkugeln aus Edelstahl hinzu.

Schließen Sie die beladene Mahlkammer und tauchen Sie sie 3 Minuten lang vollständig in flüssigen Stickstoff. Mahlen Sie dann die gefrorene Probe bei 30 Hertz für 3 Minuten. Wiederholen Sie das Eintauchen in flüssigen Stickstoff und das Mahlen, bis das ECM zu einem feinen Pulver gemahlen ist.