JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:55 Min. • April 30th, 2023
Die perineurale Invasion oder PNI bezieht sich auf die Wanderung von Krebszellen entlang der Nerven und deren anschließende Invasion in das Perineurium - eine geeignete Mikroumgebung für das Wachstum und die Metastasierung von Krebs.
Um PNI in vitro nachzuahmen, beginnen Sie damit, einen Tropfen extrazelluläre Matrix oder EZM-Suspension auf eine Kulturschale zu geben, so dass sie die Form einer Hemisphäre annimmt. Inkubieren Sie nun die Kulturschale, um die strukturellen und funktionalen Merkmale des 3D-Gerüsts zu verstärken.
Platzieren Sie als Nächstes vorsichtig ein vorgeerntetes Spinalganglion oder DRG, eine Ansammlung sensorischer Neuronen, in der Mitte des halbfesten EZM-Tröpfchens. Inkubieren, um das DRG in das ECM-Tröpfchen einzubetten.
Danach ein geeignetes Wachstumsmedium hinzufügen und inkubieren. Die mit Nährstoffen angereicherte ECM begünstigt das Keimen von DRG in kleine Nervenvorsprünge, die Neuriten genannt werden und radial zum Umfang des Tröpfchens herauswachsen.
Entfernen Sie das verbrauchte Medium, um das ECM-Tröpfchen für den nachfolgenden Assay vorzubereiten. Säen Sie fluoreszenzgefärbte adhärente Krebszellen über dem Tröpfchen. Aufgrund der halbkugelförmigen F
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