Cancer Side Population Discrimination Assay: Eine Methode zur Isolierung von krebsstammähnlichen Zellen mit dem Hoechst Dye Efflux Assay

Ein Tumor enthält einen kleinen Teil von stammähnlichen Zellen, die als Seitenpopulation bezeichnet werden. Diese Zellen sind chemoresistent und damit für den Krebsrückfall verantwortlich.

Um die Seitenpopulation von Krebszellen zu isolieren, geben Sie zunächst Hoechst - eine fluoreszierende Farbstofflösung - in das Fläschchen mit der Krebszellsuspension. In normalen Krebszellen dringen Hoechst-Moleküle in den Zellkern ein und binden an die A-T-reiche Region in der DNA, was zu einer hohen Fluoreszenz in diesen Zellen führt.

Im Gegensatz dazu enthält die Seitenpopulation eine hohe Konzentration an ABC-Transportern - Effluxpumpen, die die Farbstoffmoleküle schnell aus der Zelle entfernen. Dieser aktive Ausfluss von Farbstoffmolekülen lässt die Seitenpopulation mit geringer Intensität fluoreszieren.

Nehmen Sie nun ein weiteres Fläschchen mit mit Hoechst behandelten Krebszellen und fügen Sie Verapamil hinzu. Dieses Fläschchen dient als Kontrolle, da Verapamil die ABC-Transporter blockiert. Dieser Schritt bewirkt eine Verringerung des Hoechst-Ausflusses und hält den Farbstoff in den Seitenpopulationszellen zurück.

Als nächstes färbst du die Zellen in beiden Fläschchen mit Propidiumiodid