JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:41 Min. • April 30th, 2023
Salisphären sind in vitro selbstaggregierende Kulturen von Epithelzellen, die aus der Speicheldrüse stammen. Um Speichelsphären zu kultivieren, beginnen Sie damit, das menschliche Speicheldrüsengewebe in einer Kulturplatte zu entnehmen.
Mit einer Schere das Taschentuch in feine Stücke hacken. Ergänzen Sie diese Stücke anschließend mit einer Dissoziationslösung, die Kollagenase- und Dispase-Enzyme enthält, und inkubieren Sie. Diese Enzyme verdauen die im Gewebe vorhandene extrazelluläre Matrix.
Reiben Sie weiter, um das Gewebe zu homogenisieren. In diesem Schritt werden die Epithelzellen und Erythrozyten in die Lösung freigesetzt. Verwenden Sie anschließend ein Zellsieb und filtrieren Sie das Gewebehomogenat in ein frisches konisches Röhrchen, um unverdaute Gewebestücke und Ablagerungen zu entfernen. Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren.
Nach der Zentrifugation wird der Überstand verworfen und das Zellpellet im Erythrozyten-Lysepuffer resuspendiert. Dieser Puffer reißt die in der Zellsuspension vorhandenen Erythrozyten auf.
Zentrifugen Sie nun, um die Epithelzellen zu pelletieren. Resuspendieren Sie das Pellet in ein geeignetes epitheliales Zellwachstumsmedium. Bereiten
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