Extrazelluläre DNA-Färbung: Eine Methode zur Identifizierung extrazellulärer DNA in FFPE-Gewebeschnitten

Eine sterbende Zelle setzt außerhalb der Zelle einen Teil der DNA frei, der als extrazelluläre DNA bezeichnet wird. Um extrazelluläre DNA zu färben, beginnen Sie mit einem formalinfixierten, paraffineingebetteten (FFPE) Gewebeschnitt auf einem Objektträger. Erhitzen Sie den Objektträger für die gewünschte Dauer. Dies erleichtert die Befestigung von Gewebe auf der Objektträgeroberfläche und macht das umgebende Paraffin weich.

Tauchen Sie den Objektträger in Entparaffinierungsflüssigkeit, um die Paraffinschicht um das Gewebe herum vollständig aufzulösen. Tauchen Sie anschließend den Objektträger in abnehmende Ethanolkonzentrationen, um das entparaffinisierte Gewebe zu rehydrieren. Tauchen Sie den Objektträger nach der Rehydrierung in kochende Antigen-Rückgewinnungslösung. Bei dieser Behandlung werden die Epitope demaskiert, die während des Fixationsprozesses verändert wurden.

Überlagern Sie den Objektträger mit primären Antikörpern und lassen Sie sie an spezifische, unmaskierte Epitope binden, die auf der Zelle vorhanden sind. Fügen Sie dann fluoreszenzmarkierte Sekundärantikörper hinzu, die an die Primärantikörper binden. Tauchen Sie den Objektträger in Sudan Black-Lösung, um die Hi