Modellierung eines orthotopen Blasentumors im Mausmodell: Ein Verfahren zur intravesikalen Verabreichung von Krebszellen in die Blase von Mäusen

Die intravesikale Instillation erleichtert die Abgabe von Krebszellen in die Harnblase eines Empfängertieres. Bereiten Sie zunächst eine betäubte weibliche Maus in Rückenlage auf einem Heizkissen vor, um ihre Körpertemperatur zu regulieren. Entleeren Sie die Blase mit Urin.

Montieren Sie als Nächstes einen Katheter, der mit einer Spritze verbunden ist, die Poly-L-Lysin oder PLL-Lösung enthält. Schmieren Sie die Katheterspitze, um ein reibungsloses Einführen der Harnröhre zu gewährleisten und Zugang zur Blase zu erhalten. Nach dem Einführen injizieren Sie die PLL-Lösung langsam in die Blase.

Die langsame Abgabe von PLL verhindert den vesikoureteralen Reflux - den Rückfluss des Urins von der Blase zu den Harnleitern und Nieren. Setzen Sie einen Stopfen auf den Katheter, um einen vorzeitigen Ausfluss zu verhindern. Die injizierten positiv geladenen PLL-Moleküle interagieren und haften an der negativ geladenen Glykosaminoglykan-Beschichtung an der Innenwand der Blase.

Entfernen Sie den Katheter und befreien Sie die Blase von der ungebundenen PLL-Lösung und dem Urin. Injizieren Sie mit einer weiteren Katheter-Spritzen-Anordnung langsam eine gekühlte Krebszellsuspension in die Blase, um einen vesikoureteralen Reflux und die anschließende Zellimplantation in die Nieren zu verhindern. Befestigen Sie den Stopper am Katheter.

Die veränderte Oberflächenladung der Glykosaminoglykanschicht verstärkt ihre elektrostatische Wechselwirkung mit Krebszellen und erleichtert deren Adhäsion. Entfernen Sie den Katheter und befreien Sie die Blase von nicht anhaftenden Krebszellen und dem Urin. Im Laufe der Zeit vermehren sich die implantierten Krebszellen in der Blase, um Primärtumore zu etablieren.

Sobald eine weibliche Maus betäubt wurde, sorgen Sie für Flüssigkeitszufuhr durch eine intraperitoneale Injektion von Hartmann-Lösung in einer Menge von 0,1 Millilitern pro 10 Gramm Körpergewicht. Wiederholen Sie dies während der Narkose alle ein bis zwei Stunden.

Tragen Sie anschließend eine sterile Augensalbe auf beide Augen auf. Bei Bedarf erneut auftragen. Positionieren Sie dann die Maus in Rückenlage auf Papiertüchern über einem Wärmekissen, um die Körpertemperatur zu halten. Sichern Sie anschließend die Hinterbeine mit Klebeband. Üben Sie nun sanften Druck auf die untere Bauchregion aus und sammeln Sie den Urin in einem 1,5-Milliliter-Röhrchen.

Laden Sie als Nächstes eine 1-Milliliter-Spritze mit steriler PLL und legen Sie einen 24-Gauge-IV-Katheter an, wobei das Nadelmandrin entfernt wurde. Tragen Sie Gleitmittel auf die Spitze des Katheters auf. Führen Sie dann den Katheter in die Harnröhre ein und führen Sie ihn mit einer Pinzette zur Blase. Stoppen Sie, wenn ein Widerstand zu spüren ist. Stoßen Sie dann langsam 50 Mikroliter PLL mit einer Geschwindigkeit von 10 Mikrolitern alle 20 Sekunden aus, um einen vesikoureteralen Reflux zu vermeiden.

Lassen Sie nun den Katheter 20 Minuten lang mit einem Stopfen in der Blase, um einen Abfluss zu verhindern. Entfernen Sie nach 20 Minuten den Katheter und befreien Sie die Blase von jeglichem Inhalt, indem Sie sanft auf den Unterbauch drücken. Spülen Sie dann mit einer 1-Milliliter-Spritze den restlichen Inhalt aus dem Katheter.

Mischen Sie nun die MB49-PSA-Zellen durch Pipettieren gründlich und füllen Sie sie in eine 1-Milliliter-Spritze. Legen Sie den Katheter an und schmieren Sie ihn wie zuvor. Führen Sie den Katheter wie zuvor in die Blase ein und beginnen Sie mit der Injektion der Zellen mit einem allmählichen Auswurf von 10 Mikrolitern alle 20 Sekunden. Warten Sie dann eine Stunde.

Entfernen Sie nach einer Stunde den Katheter und befreien Sie die Blase von jeglichem Inhalt. Lassen Sie dann die Maus los. Positionieren Sie es auf der Bauchseite und beleben Sie es mit einer Injektion von Atipamezol. Überwachen Sie nun die Maus, bis sie wieder sternal liegt, und bringen Sie sie dann in ihren Heimatkäfig zurück.