Abgabe von DNA-Plasmiden in das Urothel der Mausblase: Ein auf Elektroporation basierendes Verfahren zur effizienten Verabreichung von DNA-Plasmiden in Urothelzellen der Mausblase zur Generierung gentechnisch veränderter Modelle

Bereiten Sie zunächst eine betäubte weibliche Maus in Rückenlage vor. Stellen Sie sicher, dass die Blase vollständig entleert ist. Führen Sie durch die Harnröhrenöffnung einen geschmierten Katheter ein. Die Schmierung hilft bei der reibungslosen Passage der Harnröhre für den Eintritt in die Blase.

Machen Sie nach der Katheterisierung einen Bauchschnitt und präparieren Sie die innere Muskulatur, um die Blase freizulegen. Als nächstes pipettieren Sie eine Suspension von DNA-Plasmiden, die mit einem geeigneten Farbstoff gemischt sind, in das äußere Ende des Katheters. Diese DNA-Plasmide kodieren für ein fluoreszierendes Reportergen.

Befestigen Sie eine Spritze am Katheter und schieben Sie sie, um die Plasmidlösung in die Blase zu bringen. Die injizierten Farbstoffmoleküle färben die Blase und bestätigen die erfolgreiche Verabreichung der Plasmidlösung. Entfernen Sie die Katheteranordnung und ziehen Sie die äußere Harnröhrenöffnung fest, um ein Ausfließen der Plasmidlösung zu verhindern.

Kneifen Sie nun die Blase mit zwei Elektroden zusammen, die mit einem Elektroporationsgenerator verbunden sind. Wenden Sie elektrische Impulse mit geeigneter Spannung für einen gewünschten Zeitraum an