JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 3:24 Min. • April 30th, 2023
Bei der leptomeningealen Erkrankung metastasieren Krebszellen aus anderen Körperorganen in die Zerebrospinalflüssigkeit oder den Liquor, die in den Leptomeningen enthalten sind - dünnen Gewebeschichten, die das Gehirn umgeben.
Die intrazerebroventrikuläre Injektion erleichtert die direkte Verabreichung des Arzneimittels im Liquor und umgeht die Blut-Hirn-Schranke.
Bereiten Sie zunächst eine betäubte Maus in Bauchlage vor.
Schneiden Sie den Kopf ein, um den Schädel freizulegen. Lokalisieren Sie das Bregma - den Verbindungspunkt zwischen koronaler und sagittaler Naht.
Bohren Sie mit einem Mikrobohrer in angemessenem Abstand zum Bregma ein Loch in den Schädel, um an die äußerste meningeale Schicht aus dichtem Bindegewebe – die Dura mater – zu gelangen.
Führen Sie dann vorsichtig die Ommaya - eine kleine Injektionsöffnung - in das Loch ein.
Sobald dies erledigt ist, nähen Sie die umgebende Haut und lassen Sie die Ommaya für eine optimale Dauer anhaften.
Verbinden Sie anschließend die mit der gewünschten Wirkstoffsuspension gefüllte Spritze mit der Ommaya.
Nachdem Sie eine geeignete Durchflussrate eingestellt haben, injizieren Sie die Arzneimittelsuspension in die Dura mater.
Die Ommaya bietet einen sterilen Weg für die direkte Verabreichung von Medikamenten in den Liquor in den Hirnventrikeln des Gehirns.
Nehmen Sie nun die Spritze ab und lassen Sie die Ommaya für die nachfolgende Dosierung intakt im Schädel.
Lassen Sie die Maus wiederherstellen.
Mit der Zeit wandern die Wirkstoffmoleküle in Richtung Krebsherd und verhindern das Wachstum und die Vermehrung von Krebszellen.
Montieren Sie die Maus-Ommaya-Injektionsvorrichtung mit einer 25G-Miniatur-Injektionsöffnung und einer 1-Millimeter-Distanzscheibe.
Verwenden Sie einen sterilen Cyanacrylat-Klebstoff, um das Eindringen von etwa 2,5 Millimetern der Metallkanüle in die rechte Gehirnhälfte zu gewährleisten, und bereiten Sie die Haut gemäß der sterilen Technik vor.
Machen Sie einen kleinen Hautschnitt, gefolgt von einer stumpfen Dissektion des darunter liegenden Unterhautgewebes, um den Schädel freizulegen. Trocknen Sie den Schädel mit Wasserstoffperoxid-getränkten Applikatorstiften mit Wattespitze.
Bohren Sie ein 0,9 Millimeter großes Bohrloch in den Schädel, 0,5 Millimeter nach hinten und 1,1 Millimeter lateral des Bregmas, um die Dura mater freizulegen.
Schieben Sie den Mikrobohrer zur Seite und ritzen Sie den Knochen unmittelbar um das Bohrloch herum vorsichtig ein. Befestigen Sie eine Injektionsöffnung mit einem sterilen Cyanacrylat-Klebstoff am Schädel und führen Sie sie bis zu einer Tiefe von etwa 2,5 Millimetern ein.
Nähen Sie den Schnitt mit 4-0 nicht resorbierbaren Nylonnähten in einem unterbrochenen Stichmuster oder einer Beutelfadennaht. Halten Sie postoperative Mäuse zur Genesung in einzelnen Käfigen unter.
Um die Maus zu dosieren, greifen Sie mit einem Port-Injektionsadapter und einer Hamilton-Spritze auf die Murine Ommaya zu. Halten Sie mit einer Pinzette die Oberseite des Miniatur-Injektionsanschlusses fest und führen Sie den Injektoradapter vorsichtig vollständig in das Septum des Anschlusses ein.
Sobald die Injektion erfolgt ist, lösen Sie die Murine Ommaya mit einer Pinzette vom Port-Injektionsadapter.