Luciferase-markiertes Gliom-Stammzellmodell: Eine Lentivirus-vermittelte Methode zur Vorbereitung von Luciferase-markierten Gliom-Stammzellen für therapeutische In-vitro-Studien
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Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:17 Min. • April 30th, 2023
Gliom-Stammzellen oder GSCs sind eine Subpopulation des Glioms - einer Krebserkrankung der Gliazellen im Gehirn.
Die Markierung dieser GSCs mit biolumineszierenden Enzymen wie Luciferase hilft bei der Etablierung von Hochdurchsatz-Bildgebungsassays für das Wirkstoffscreening.
Um mit Luciferase markierte GSCs herzustellen, beginnen Sie mit einer Kultur von GSCs in einem geeigneten Wachstumsmedium.
Zentrifugieren Sie die Kultur, um ein Zellpellet zu erhalten, und entfernen Sie den Überstand.
Fügen Sie dem Pellet geeignete Verdauungsenzyme hinzu. Diese Enzyme dissoziieren Zellverbände und bauen alle Spuren von Bindegewebe ab, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten.
Zentrifugieren Sie nun die einzellige Suspension und entfernen Sie den Überstand. Suspendieren Sie das Pellet in einem frischen Medium.
Als nächstes säen Sie die gewünschte Konzentration der Zellen in eine Kulturplatte.
Inkubieren Sie die Kultur und lassen Sie die Zellen an der Kulturplatte haften.
Anschließend wird der gewünschte Titer eines virushaltigen Genkonstrukts für Luciferase-verstärktes grün fluoreszierendes Protein oder EGFP hinzugefügt und inkubiert.
Das Virus interagiert mit den Oberflächenrezeptoren von GSCs
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