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Krebsforschung
0 Aufrufe • 6:23 Min. • April 30th, 2023
Mikroglia sind Makrophagen des Gehirns, die helfen, Krankheitserreger, Zelltrümmer und krebsartige Nervenzellen oder Neuroblastome durch einen Prozess namens Phagozytose zu entfernen.
Um die Phagozytose in vitro nachzuahmen, beginnen Sie mit einer Kultur von Neuroblastomzellen, die in Paraformaldehyd fixiert sind.
Paraformaldehyd, ein chemisches Fixiermittel, bewirkt eine zufällige Verteilung von Membranphospholipiden wie Phosphatidylserin, was zu ihrer Translokation an die äußere Oberfläche der Zellmembran führt und gleichzeitig die Zellstruktur stabilisiert.
Geben Sie nun einen pH-empfindlichen aminreaktiven Fluoreszenzfarbstoff in die Neuroblastom-Zellkultur und inkubieren Sie.
Die Farbstoffmoleküle binden an die Amingruppen von Phosphatidylserin auf der Zelloberfläche des Neuroblastoms.
Das Röhrchen zentrifugieren und den Überstand entfernen, der ungebundene Farbstoffmoleküle enthält. Spülen Sie das Küvettenpellet mit einem geeigneten Puffer und zentrifugieren
Sie es.Entfernen Sie den Überstand und suspendieren Sie das Pellet wieder im Nährmedium.
Als nächstes säen Sie vorgefärbte Makrophagen in einer Kulturplatte. Gefärbte Makrophagen erscheinen rot mit einem blauen Kern.
Geb
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