JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:55 Min. • April 30th, 2023
Um Zellkerne zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme einer frisch gefrorenen Gliomprobe - einem Tumor, der aus den Gliazellen des Gehirns stammt - in einer Petrischale.
Stellen Sie die Petrischale auf Eis, um einen Gewebeabbau zu vermeiden.
Anschließend die Gewebeprobe in kleine Stücke zerkleinern.
Geben Sie einen vorgekühlten Lysepuffer zu den gehackten Gewebestücken. Übertragen Sie die Mischung in einen Dounce Homogenisator. Homogenisieren Sie das Gewebe mit dem Stößel, um die Zellen aufzulösen und die Lyse einzuleiten.
Übertragen Sie nun das Homogenat in ein Mikrozentrifugenröhrchen, das einen frischen Lysepuffer enthält.
Brechen Sie das Homogenat mechanisch mit einer Pipettenspitze mit breiter Bohrung auf. Dieser Schritt erleichtert die Freisetzung von zytoplasmatischen Organellen aus den Zellen.
Filtrieren Sie anschließend das Homogenat mit einem entsprechend großen Zellsieb in ein frisches Röhrchen, um Gewebeablagerungen und andere Verunreinigungen zu entfernen.
Nehmen Sie nach der Filtration das Filtrat, das verschiedene Zellorganellen enthält.
Zentrifugieren Sie das Filtrat bei niedriger Geschwindigkeit, um die dichteren Kerne am Boden zu pelletieren, während die andere
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