Gradientenzentrifugation basierte Reinigung von Kernen: Eine Technik zur Gewinnung einer hochreinen Fraktion intakter Kerne mittels Dichtegradientenzentrifugation

Um intakte Zellkerne zu isolieren und zu reinigen, beginnen Sie mit der Entnahme einer rohen Kernfraktion in einem Röhrchen. Die Fraktion enthält intakte Kerne sowie zerbrochene Kernfragmente und Trümmer.

Diese Fraktion wird mit einem geeigneten Dichtegradientenmedium so gemischt, dass sie eine Suspension mit der niedrigsten Konzentration bildet.

Nun werden Lösungen mit zunehmender Dichte des gleichen Gradientenmediums unter die vorpräparierte Rohkernfraktion geschichtet, um einen mehrstufigen diskontinuierlichen Dichtegradienten zu erzeugen. Dieser Schritt ermöglicht es der rohen Kernfraktion, ein Band am oberen Rand des Gradienten zu bilden.

Zentrifugieren Sie anschließend das Röhrchen bei niedriger Geschwindigkeit.

Aufgrund der Unterschiede in Form und Masse wandern intakte Kerne anders als Trümmer und Kernfragmente. Dies führt dazu, dass intakte Zellkerne eine separate Bande bilden.

Nach der Zentrifugation lokalisiert man die unterschiedliche Bande, die aus intakten Kernen besteht, an der Grenzfläche der Dichtegradientenlösungen.

Aspirieren Sie mit einer Pipette die oberen Schichten des Gradienten, um den Zugang zur reinen Kernbande zu erleichtern. Sammeln Sie die kernhaltige B