Kryokonservierung des Gehirns von Mäusen durch Einfrieren: Eine Technik zum schnellen Einfrieren ganzer Mäusehirnproben für die histologische Analyse

Um murine Gehirnproben durch Schockfrosten zu kryokonservieren, nehmen Sie zunächst ein mit Isopentanlösung - einer hochleitfähigen Flüssigkeit - gefülltes Becherglas und tauchen Sie es in ein Glas mit flüssigem Stickstoff.

Frieren Sie das Isopentan ein, bis die Lösung zähflüssig wird.

In der Zwischenzeit nehmen Sie eine ganze Maushirnprobe mit Präfix in Saccharoselösung. Diese Behandlung verhindert eine Verformung des Hirngewebes in den nachfolgenden Schritten.

Entnehmen Sie die Gehirnprobe aus der Saccharoselösung und tupfen Sie sie trocken, um alle Spuren von Saccharose zu entfernen.

Positionieren Sie als Nächstes das Gehirn in der gewünschten Ausrichtung in einem tiefen Kryomold, der eine Schicht aus Einbettungsmedium enthält.

Überlagern Sie das Gehirn mit mehr Einbettungsmedien in der Kryomolde, um sicherzustellen, dass das gesamte Organ bedeckt ist.

Tauchen Sie dann das Kryomold mit dem eingebetteten Gehirn in das vorgekühlte Isopentanbad. Die schnelle Abkühlung des Hirngewebes auf eine extrem niedrige Temperatur gewährleistet den Erhalt der Gehirnarchitektur ohne jegliche Verzerrung.

Lassen Sie nun die Gehirnprobe einfrieren, bis sich das Einbettungsmedium verfestigt und ein