Fixierung und Färbung von kryokonservierten Gewebeschnitten: Ein Verfahren zur Verarbeitung von gefrorenen Hirngewebeschnitten für die Lasermikrodissektion

Um spezifische Zellpopulationen in einem heterogenen Hirntumorgewebe der Maus für ihre anschließende Isolierung zu differenzieren, beginnen Sie mit der Entnahme eines Objektträgers mit dem kryokonservierten Hirntumorgewebeausschnitt von Interesse.

Inkubieren Sie das Gewebe nacheinander in abnehmenden Ethanolkonzentrationen. Ethanol löst das Einbettungsmedium, das in das Gewebe eingedrungen ist, und fixiert das Gewebe, während die Integrität der Nukleinsäure erhalten bleibt.

Zusätzlich rehydriert Ethanol das Gewebe, so dass in den nachfolgenden Schritten eine gleichmäßige Färbung möglich ist.

Behandeln Sie nun das Gewebe mit Cresylviolett. Cresylviolett - ein basischer Farbstoff - färbt saure zelluläre Bestandteile wie Nukleinsäuren.

Danach wird das Gewebe mit Eosin Y gegengefärbt. Eosin Y - ein saurer Farbstoff - färbt grundlegende zelluläre Bestandteile wie zytoplasmatische Proteine.

Dieser Schritt der differentiellen Färbung hilft bei der Unterscheidung zwischen dem Zytoplasma und anderen zellulären Strukturen und ermöglicht die Identifizierung von Zellen, die von Interesse sind.

Tauchen Sie das Gewebe nach der Färbung in steigende Konzentrationen von Ethanol, um das Gewebe zu de