SEC-basierte Isolierung von extrazellulären Vesikeln aus Mikroglia: Eine Technik zur Isolierung extrazellulärer Vesikel aus Mikroglia-konditionierten Kulturmedien

Mikrogliazellen geben Immunmediatoren in Form von extrazellulären Vesikeln oder EVs, einschließlich größerer apoptotischer Körper und kleinerer mikrogroßer Vesikel, in vitro an Wachstumsmedien ab.

Um EVs zu isolieren, beginnen Sie mit der Einnahme von Mikroglia-konditionierten Medien. Dieses Nährmedium enthält Mikrogliazellen zusammen mit den freigesetzten EVs. Zentrifugieren Sie das Medium, um die Zellen zu pelletieren.

Sammeln Sie den Überstand mit den EVs, den Rückständen und den Proteinaggregaten in einem frischen Röhrchen. Zentrifugieren Sie erneut, um zelluläre Trümmer und große apoptotische Körper zu entfernen.

Den Überstand in ein Ultrazentrifugenröhrchen überführen. Zentrifugieren Sie mit hoher Geschwindigkeit.

Der Überstand, der das verbrauchte Medium enthält, wird verworfen und das EV- und Proteinaggregatpellet in den gewünschten Puffer resuspendiert.

Nehmen Sie gleichzeitig eine Größenausschluss-Chromatographiesäule mit einem geeigneten Filter an der Basis.

Verpacken Sie die Säule fest mit einer Gel-Filtrationsmatrix, die aus kugelförmigen Gelkügelchen besteht, die ein poröses Sieb mit definierter Porengröße bilden.

Laden Sie das EV und die Proteinaggregatsuspensionssus