Fluoreszenzbasierter Transwell-Makrophagen-Attraktionsassay: Eine In-vitro-Methode zur Untersuchung der Tumor-Makrophagen-Interaktion durch chemisch induzierte Chemotaxis

Als Reaktion auf bestimmte chemische Lockstoffe, die von soliden Tumoren freigesetzt werden, infiltrieren Immunzellen wie tumorassoziierte Makrophagen oder TAMs die soliden Tumore. Anschließend erleichtern diese TAMs die Tumorprogression.

Um die Wechselwirkungen zwischen TAMs und Tumorzellen in vitro zu untersuchen, beginnen Sie mit der Entnahme einer Multiwell-Platte mit einem membranösen Einsatz. Diese Anordnung trennt den Brunnen vorübergehend in zwei Kammern.

Geben Sie als Nächstes eine Suspension von TAMs in das obere Fach des Transwells.

Ergänzen Sie das untere Kompartiment des Transwells mit einem konditionierten Medium, das mit chemischen Lockstoffen angereichert ist, die von Tumorzellen abgesondert werden.

Inkubieren Sie die Platte für die gewünschte Zeit.

Während der Inkubation ziehen chemische Modulatoren TAMs an. Dies führt dazu, dass TAMs durch chemisch induzierte Chemotaxis über die poröse Insertmembran in das untere Kompartiment gelangen.

Entferne nun den Einsatz aus der Vertiefung. Das konditionierte Medium mit der migrantischen TAM-Population wird in eine geeignete Platte für die Fluoreszenzmessung überführt.

Behandeln Sie die Zellen mit einem Lysepuffer, der Fluor