DNA-Synthese-Assay: Eine Technik zur Beurteilung der DNA-Synthese in proliferierenden Zellen durch den Einbau von radioaktivem tritiiertem Thymidin

Beginnen Sie mit der Entnahme einer Multi-Well-Platte mit adhärenten Zellen.

Behandeln Sie diese Zellen mit einem Medium, das tritiiertes Thymidin - eine radioaktive Version von Thymidin - enthält, und inkubieren Sie.

Während der Inkubation bauen aktiv replizierende Zellen radioaktives Thymidin ein. Dieses Thymidin paart sich gegenüber Adenosin und erzeugt radioaktiv markierte DNA in proliferierenden Zellen.

Entfernen Sie die verbrauchten Medien aus den Vertiefungen. Fügen Sie einen Lysepuffer hinzu, um die Zellen zu lysieren und DNA in die Suspension freizusetzen.

Bereiten Sie die Montage des Zellharvesters vor, indem Sie die Sammelrohre des Harvesters über die Vertiefungen der Mikrotiterplatte legen.

Wenden Sie Saugdruck an, um die Aspiration von suspendierter DNA aus den Vertiefungen zu ermöglichen. Diese DNA lagert sich auf dem Filterpapier ab und bildet bestimmte Flecken.

Schneiden Sie die Filterpapierspalten mit DNA-Flecken aus. Übertragen Sie diese Chads einzeln in Szintillationsfläschchen.

Überlagern Sie das Filterpapier mit einem Szintillationscocktail. Stellen Sie das Fläschchen in einen Flüssigszintillationszähler.

Im Inneren des Zählers gibt die markierte DNA Energie du