NPC Neurosphere Assay: Ein in vitro Assay zur Beurteilung der Migrationsreaktion von neuralen Vorläuferzellen aus der Neurosphäre

Neurosphären sind nicht-adhärente kugelförmige Aggregate von neuronalen Vorläuferzellen oder NPCs.

Wenn NPCs unter bestimmten adhärenten Kulturbedingungen plattiert werden, können sie spontan aus der Neurosphäre auswandern.

Um die Migrationsreaktion von NPCs zu beurteilen, bereiten Sie zunächst eine NPC-Suspension mit der gewünschten Dichte in einem geeigneten Medium vor.

Anschließend wird die Zellsuspension in eine medienhaltige Kulturplatte ausgesät und inkubiert.

Die spezifischen Wachstumsfaktoren in den Medien unterstützen die Vermehrung von Zellen. Darüber hinaus bleiben die Zellen durch das Fehlen eines Beschichtungssubstrats in Medien suspendiert, was es ihnen ermöglicht, 3D-Zellaggregate, sogenannte Neurosphären, zu bilden.

Wenn Sie die gewünschte Größe erreicht haben, sammeln Sie die Neurosphären.

Zentrifugieren Sie das Neurosphären-Pellet und resuspendieren Sie es in den verdünnten Medien.

Dann wird die Neurosphärensuspension in eine mit extrazellulärer Matrix beschichtete Platte mit verdünntem Medium plattiert und inkubiert.

Während der Kultur haften die Neurosphären an der extrazellulären Matrix.

Im Laufe der Zeit beginnen einige NPCs aufgrund der Bestandteile der extra