Generierung von induzierten neuralen Stammzellen (iNSCs) aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMNCs): Ein auf dem Sendai-Virus basierendes Verfahren zur Umprogrammierung von PBMNCs in iNSCs

Um somatische Zellen in induzierte neurale Stammzellen oder iNSCs umzuprogrammieren - Stammzellen mit hoher Selbsterneuerungs- und Differenzierungsfähigkeit, beginnen Sie mit der Kultivierung von mononukleären Zellen des peripheren Blutes in einem serumfreien Medium, um Erythroblasten zu expandieren.

Pipettieren Sie anschließend die Erythroblastensuspension in eine Kulturplatte. Behandeln Sie die Zellen mit rekombinanten Sendai-Viren oder SeV. Diese Viren kodieren für die Reprogrammierung von Transkriptionsfaktoren. Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu sedimentieren und zu inkubieren.

Nach der SeV-Fusion mit der Wirtszellmembran durchläuft das Virusgenom eine Transkription und anschließend eine Translation im Zytoplasma. Die ektopische Expression von Transkriptionsfaktoren löst den Prozess der Zellreprogrammierung aus, ohne dass die Gene in das Wirtsgenom integriert werden.

Zentrifugieren Sie nun die Kultur, um die Viren zu entfernen. Die transduzierten Zellen werden in einem geeigneten Medium resuspendiert, gefolgt von der Beschichtung. Zentrifugieren Sie ferner, um Zelltrümmer zu entfernen. Resuspendieren Sie die Zellen in iNSC-Medien.

Anschließend säen Sie die Zellen in einer pr