Repetitiver Tumor-Challenge-Assay: Ein In-vitro-Kultur-Assay zur Bewertung von chimären Antigenrezeptor (CAR)-T-Zellen auf das Potenzial zur wiederholten Tumorabtötung

Bei der Krebsimmuntherapie werden chimäre Antigenrezeptor-T-Zellen oder CAR-T-Zellen verwendet, gentechnisch veränderte T-Zellen, die spezifisches CAR exprimieren und sich an Tumorzellen anheften und so den Zelltod verursachen. Um das tumortötende Potenzial von CAR-T-Zellen in vitro zu bewerten, beginnen Sie mit einer Sphäroidkultur von Hirntumoren. Behandeln Sie die Kultur mit einer geeigneten Enzymlösung, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten. Zentrifugieren Sie das Küvettenpellet und resuspendieren Sie es in einem geeigneten Medium.

Pipettieren Sie das gewünschte Volumen an Tumorzellen, gefolgt von CAR-T-Zellen in einer Multi-Well-Platte. In Kultur erkennen spezifische Rezeptoren auf CAR-T-Zellen spezifische Antigene auf Tumorzellen und binden an sie. Diese Bindung aktiviert CAR-T-Zellen und setzt Zytokine frei, was zum Tod der Tumorzellen führt. Die Aktivierung führt auch zu einer erhöhten Proliferation der CAR-T-Zellen.

Ersetzen Sie das Medium durch ein gleiches Volumen an Tumorzellen. Wiederholen Sie die Zellzugabe an abwechselnden Tagen. Nach wiederholter Antigenexposition kann es bei einigen CAR-T-Zellen zu einer Zellerschöpfung kommen. Diese Zellen weisen eine begrenzte