Fluoreszenzmarkierung von Gliomzellen: Eine lentivirale vektorbasierte Transfektionsmethode zur Gewinnung von Gliomzellen, die fluoreszierendes Protein für die Tiefenbildgebung exprimieren

Bei der In-vivo-Bildgebung von Hirntumoren werden fluoreszenzmarkierte Krebszellen in das Gehirn von Mäusen injiziert, um die Tumorentwicklung zu beobachten. Für die Fluoreszenzmarkierung inkubieren Sie Gliomzellen mit Lentivirus-Partikeln. Der lentivirale Vektor trägt das Gen für das infrarotfluoreszierende Protein iRFP.

Das Virus bindet an die Zelloberfläche des Glioms und gibt RNA in die Zelle ab. Zelluläre Enzyme wandeln die virale RNA in doppelsträngige DNA um, die sich in das zelluläre Genom integriert und die iRFP-Expression ermöglicht. Die Anregungs- und Emissionsmaxima von iRFP liegen in einem nahinfraroten Bereich, in dem das Gewebe eine minimale Absorption und Streuung aufweist. Dies ermöglicht eine genaue Bildgebung des tiefen Gewebes.

Entfernen Sie anschließend das verbrauchte Medium und fügen Sie Trypsin hinzu. Trypsin, ein Protease-Enzym, verdaut die Adhäsionsproteine und löst die Zellen von der Kolbenoberfläche. Pipettieren Sie wiederholt, um die einzelnen Zellen zu trennen. Sammeln Sie die Zellsuspension in einem Röhrchen und zentrifugieren Sie. Fügen Sie nun einen geeigneten Puffer hinzu, um das Pellet wieder zu suspendieren.

Geben Sie die Zellsuspension in Durchf