Isolierung und Kultivierung von primären Hirnperizyten: Ein Verfahren zur Isolierung und Kultivierung von Perizyten aus Rinderhirnkapillaren ohne Kontamination mit Endothelzellen

Im Zentralnervensystem sind Perizyten multifunktionale Zellen, die die Endothelzellen umhüllen, die die innere Zellauskleidung der Kapillaren bilden. Perizyten helfen, den Blutfluss zu regulieren und die Homöostase des Gehirns aufrechtzuerhalten.

Um Perizyten zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme von gefrorenen Rinderhirnkapillaren in einer Durchstechflasche. Füllen Sie den Inhalt nach dem Auftauen in ein Röhrchen mit dem gewünschten Medium. Zentrifugieren Sie, um die Kapillaren zu pelletieren. Entfernen Sie den Überstand des Gefriermediums. Das Kapillarpellet wird in Medien resuspendiert und die Suspension in einen mit extrazellulären Matrixproteinen beschichteten Kolben ausgesät.

Inkubieren, damit die Kapillaren an der Beschichtung im Kolben haften können. Ersetzen Sie das Medium durch heparinhaltige Medien. In Kultur fördert die Proteinbeschichtung der extrazellulären Matrix die Migration der Perizyten von den Kapillarfragmenten und die Proliferation, während Heparin die Migration der Endothelzellen stimuliert.

Ersetzen Sie die verbrauchten Medien durch heparinhaltige Medien. Im Laufe der Zeit projizieren Perizyten längliche Fortsätze, die stark am Kolben haften. Mit begre