In utero Elektroporation basierte Genabgabe: Eine Technik zur Injektion von Plasmid-DNA in embryonale Kleinhirnzellen von Mausembryonen

Beginnen Sie mit der Entnahme eines schwangeren, anästhesierten weiblichen Mausmodells, das in Rückenlage gebracht wird. Bereiten Sie die Maus vor, indem Sie Haare aus der Bauchregion entfernen. Schnitte die Haut und die darunter liegenden Muskelschichten, um die Gebärmutterhörner freizulegen - die Stellen, an denen lebensfähige Embryonen beherbergt werden.

Ziehen Sie nun die Gebärmutterhörner aus der Bauchhöhle heraus. Nehmen Sie eine Glaskapillare mit scharfer Spitze, die die gewünschte Plasmid-DNA-Lösung enthält. Lokalisieren Sie das Gehirn des Embryos und injizieren Sie die Plasmid-DNA-Lösung durch die Gebärmutterwand in den vierten Ventrikel. Diese Position befindet sich vor dem Kleinhirnprimordium - dem gewünschten Ort für die spätere DNA-Lieferung.

Nach der Injektion ziehen Sie die leere Kapillare zurück. Als nächstes positionieren Sie für die Elektroporation des injizierten DNA-Embryos die beiden Elektroden über der Gebärmutterwand, so dass die positive Elektrode das Kleinhirnprimordium und die negative Elektrode den Bereich um die Ohren bedeckt.

Wenden Sie elektrische Impulse für die gewünschte Dauer an. Diese Impulse machen die Kleinhirn-Neuronalzellen durchlässig, so das