Isolierung von Hirngefäßen von Mäusen: Ein Protokoll zur Isolierung intakter Gefäße aus einer Gehirnprobe von Mäusen

Die Hirngefäße sind von einer Schicht eng miteinander verbundener Endothelzellen umgeben. Diese Zellen sind von einer Basalmembran umgeben, zusammen mit zellulären Komponenten wie Perizyten und Astrozyten.

Um Gehirngefäße von umgebenden Neuronen und Gliazellen zu isolieren, nehmen Sie ein Becherglas mit Mäusegehirn, das in einen Homogenisierungspuffer getaucht ist. In kleine Stücke hacken. Homogenisieren Sie das Gehirngewebe, um es zu dissoziieren und Neuronen, Gliazellen und Gehirngefäße freizusetzen. Diese Behandlung stört auch die Myelinscheide, die die Neuronen umgibt.

Füllen Sie das Homogenat in ein Röhrchen und zentrifugieren Sie es, um die Gefäße zu pelletieren. Die leichteren Bestandteile wie Neuronen und Gliazellen verbleiben im Überstand, während das Myelin eine dichte Grenzschicht bildet, die das Pellet umgibt.

Der Überstand wird verworfen und das Gefäßpellet mit der angehängten Myelinschicht in einem geeigneten Dichtegradientenmedium resuspendiert. Zentrifugieren Sie, um die Gefäße zu pelletieren, und erhalten Sie ein Band aus fettreichem Myelin, das an der Oberseite des Überstands schwimmt. Entfernen Sie das Myelinband zusammen mit dem verbrauchten Medium und suspendie