0 Aufrufe • 3:44 Min. • July 8th, 2025
Platzieren Sie zunächst eine betäubte Maus in Rückenlage auf einem Sezierbrett. Machen Sie einen Schnitt, um Zugang zur Brusthöhle zu erhalten und das Herz freizulegen. Lokalisieren Sie die Aorta und ihre Äste - die linke Arteria carotis communis und die Arteria brachiocephalic. Durchschneiden Sie diese Arterien, um das Herz zu isolieren.
Tauchen Sie das herausgeschnittene Herz sofort in eine Petrischale, die eine nährstoffreiche, sauerstoffhaltige Pufferlösung enthält. Führen Sie gleichzeitig eine Kanüle so in das Herz ein, dass ihre Spitze die aufsteigende Aorta erreicht. Verwenden Sie eine Naht, um die Kanüle zu ligieren. Verbinden Sie die Kanüle mit einer Spritze mit sauerstoffhaltiger Perfusionslösung.
Injizieren Sie die Perfusionslösung in das Herz. Dieser Schritt ermöglicht es dem Blut, die Herzkranzgefäße zu verlassen und aus den Lungenvenen auszutreten. Als nächstes verbinden Sie das kanülierte Herz mit dem Langendorff-Apparat. Verwenden Sie eine Peristaltikpumpe, um die Perfusion bei konstanter Durchflussrate durchzuführen.
Unter diesen Bedingungen perfundiert der Puffer in das Herz. Dadurch entsteht ein Kanülendruck, der die Aortenklappen verschließt, wodurch sich der Puffer durch die Koronararterien bewegt. Schließlich durchblutet der Puffer rückläufig die Herzmuskulatur und fließt später durch die Lungenvenen. Ein erfolgreich durchblutetes Herz ist nun bereit für weitere nachgelagerte Anwendungen.
Nach dem Einschläfern einer 8 bis 10 Wochen alten männlichen C57BL/6-Maus wird die Haut des Xiphoids mit einer Gewebezange angehoben. Machen Sie dann mit einer Gewebeschere einen kleinen seitlichen Schnitt durch die Haut. Führen Sie eine stumpfe Dissektion zwischen Haut und Faszien durch. Verlängern Sie den Hautschnitt in Richtung Achseln in V-Form auf beiden Seiten und setzen Sie den Schnitt durch den Brustkorb fort.
Klemmen Sie dann mit einer Gewebezange das Brustbein ein und lenken Sie den Brustkorb nach oben, um Herz und Lunge vollständig freizulegen. Ziehe das Perikard mit einer gebogenen Pinzette ab. Wenn die Thymusdrüse die großen Gefäße bedeckt, verwenden Sie zwei gebogene Pinzetten, um die Thymusdrüse zu beiden Seiten zu zerreißen. Ziehen Sie dann die Basis des Herzens vorsichtig in Richtung Schwanz, bis die Aorta und ihre Astarterien als Y-förmiges Blutgefäß sichtbar sind.
Die Aorta an der linken Arteria carotis communis durchschneiden. Schneiden Sie dann die Arteria brachiocephalica durch. Schneiden Sie das Herz heraus und tauchen Sie es sofort in eine Petrischale, die die Tyrode-Lösung enthält, um das restliche Blut auszuwaschen und abzupumpen. Übertragen Sie dann das Herz in eine andere Petrischale, die Lösung 1 enthält.
Schneiden Sie unter einem Stereomikroskop mit einer feinen Irisschere überschüssiges Gewebe ab. Stoßen Sie Luftblasen aus der Spritze aus. Führen Sie dann mit Hilfe von zwei geraden Bindezangen eine retrograde Aortenkanüle durch, wobei darauf zu achten ist, dass der gesamte Kanülenprozess unter der Flüssigkeitsoberfläche durchgeführt wird. Stellen Sie die Kanülentiefe so ein, dass sich die Kanülenspitze in der aufsteigenden Aorta befindet, und achten Sie darauf, dass die Aortenklappen nicht durchdringen.
Ligatten Sie dann mit einer 3-0-Naht vor dem Knoten die Aorta zur Kanülenkerbe. Injizieren Sie vorsichtig Lösung 1 aus der Spritze, um das Restblut auszuspülen. Verbinden Sie dann das kanülierte Herz mit dem Langendorff-Apparat und achten Sie darauf, dass keine Luftblasen in das Herz gelangen. Nach dem Anschluss des kanülierten Herzens an das Langendorff-Gerät wird das Herz ca. 2 Minuten lang mit Lösung 1 durchblutet.