Entnahme pränataler Mausembryonen: Ein Verfahren zur Entnahme von Embryonen von trächtigen Mäusen

Mausembryonen werden als Modellsysteme für die Untersuchung der frühen Embryogenese von Säugetieren verwendet. Um perinatale Mausembryonen im gewünschten Stadium der Embryonalentwicklung zu gewinnen, beginnen Sie mit einer euthanasierten trächtigen Maus in Rückenlage.

Sterilisieren Sie anschließend den Bauchbereich und machen Sie einen Querschnitt an der Bauchdecke, um die darunter liegenden Gebärmutterhörner freizulegen. Die Gebärmutterhörner sind lange röhrenförmige Strukturen, in denen sich eine Reihe von Embryonen befindet. Trennen Sie nun vorsichtig die Gebärmutterhörner vom Bauch, indem Sie sie aus dem umgebenden Gewebe herausschneiden.

Übertragen Sie die geernteten Gebärmutterhörner in eine Schüssel mit Puffer. Spülen Sie die Gebärmutterhörner aus, um Gewebeablagerungen und Blut zu entfernen. Schneiden Sie außerdem zwischen den Implantationsstellen entlang der Gebärmutterhörner ein, um jeden Embryo zu trennen. Exzidieren Sie die Decidua, die mütterliche Plazentaschicht, zusammen mit der vom Embryo stammenden Plazentascheibe.

Als nächstes entfernen Sie die kleine extraembryonale membranöse Struktur, die den Embryo umgibt und ihn mit Nährstoffen versorgt - den Dottersack. Entfernen Sie schließlich die Amnionmembran - die innerste extraembryonale Membran, die aus einem mit Flüssigkeit gefüllten Sack besteht, der den Embryo umgibt und schützt - um den Mausembryo freizusetzen.

Die gewonnenen perinatalen Embryonen können für die Untersuchung der frühen Entwicklung von Säugetieren verwendet werden.

Reinigen Sie Präparierscheren und -zangen mit 70% Ethanol. Um perinatale Embryonen bei E18.5 oder E19.5 zu sammeln, euthanasieren Sie zunächst trächtige Mäuse durch Kohlendioxid-Inhalation. Führen Sie dann eine Gebärmutterhalsluxation gemäß den NIH-Richtlinien durch.

Sprühen Sie anschließend 70% Ethanol auf die ventrale Bauchfläche des Tieres. Öffnen Sie dann mit der sterilen Präparierschere und der Pinzette schließlich die Bauchhöhle. Heben Sie die gesamte Gebärmutter an und trennen Sie sie an den Spitzen der Gebärmutterhörner vom Körper. Spülen Sie dann die gesamte Gebärmutter mit 1x PBS in einer Petrischale.

Schneiden Sie die Gebärmutter segmental mit einer Präparierschere und entfernen Sie die Plazenta-Dezidua mit einer Präparierzange, um die Embryonen in Dottersäcken freizulegen. Entfernen Sie zuerst den Dottersack und entfernen Sie dann die Amnionmembran mit einer Präparierzange, um die perinatalen Embryonen zu befreien.