0 Aufrufe • 2:53 Min. • July 8th, 2025
Um neonatale Maus-Eierstöcke zu isolieren, beginnen Sie mit einem euthanasierten neugeborenen Mauswelpen in Rückenlage auf einer chirurgischen Plattform. Machen Sie einen langen chirurgischen Schnitt an der Haut und der Körperwand, um die Bauchhöhle freizulegen. Verschieben Sie anschließend vorsichtig den Darm, um die darunter liegenden Gebärmutterhörner freizulegen.
Die Gebärmutterhörner sind zwei lange röhrenförmige Strukturen, die am Gebärmutterhals zusammenlaufen und sich von der Blase bis zu den Nieren erstrecken. Identifizieren Sie die Eierstöcke - kleine, ovale Drüsen -, die sich direkt unter den Nieren an der Spitze der Gebärmutterhörner befinden und über die Eileiter verbunden sind.
Schneiden Sie nun die Ansatzstelle des Eierstocks von jedem Gebärmutterhorn ab, um die Eierstöcke freizugeben. Die herausgeschnittenen Eierstöcke werden sofort in eine sterile Kulturschale mit geeignetem vorgewärmtem Medium überführt, um die Lebensfähigkeit der Eizellen im Gewebe zu erhalten. Stellen Sie die Kulturschale auf den beheizten Tisch eines Präpariermikroskops.
Entfernen Sie vorsichtig mit einer Nadel den Schleimbeutel der Eierstöcke, einen Sack aus Bindegewebe, der den Eierstock umgibt, und alle Reste des Eileiters. Übertragen Sie schließlich die Eierstöcke in eine Multiwell-Platte mit Medien. Die isolierten Eierstöcke können für die nachgelagerte Verarbeitung verwendet werden.
Beginnen Sie damit, 1 Milliliter Seziermedium in jede sterile Embryoschale aus Glas zu geben. Nachdem Sie die 0 bis 5 postnatalen Jungtiere gekeult haben, fassen Sie die Haut, die die Bauchdecke bedeckt, mit einer feinen Pinzette und schneiden Sie die Haut und die Körperwand ein. Ziehe diesen großen Schnitt auf und lege den Bauch frei. Die Blase ist in diesem Stadium in der Regel angeschwollen und kann punktiert werden, um die Dissektion zu erleichtern.
Schieben Sie die Eingeweide mit einer Uhrmacherzange zur Seite. Folgen Sie dann auf beiden Seiten den Gebärmutterhörnern von der Blase bis zur Niere. Der Eierstock ist eine wolkenartige Struktur, die sich direkt unter der Niere am oberen Ende der Gebärmutter befindet. Fassen Sie den Eierstock vorsichtig an und schneiden Sie ihn mit einer Schere von der Gebärmutter ab. Nachdem Sie beide Eierstöcke präpariert haben, geben Sie sie in Schalen, die mit warmem Seziermedium gefüllt sind.
Verwenden Sie ein Präpariermikroskop mit einem auf 37 Grad Celsius erhitzten Tisch, um die Eierstöcke zu präparieren. Schneiden Sie mit Insulinnadeln den Schleimbeutel und überschüssiges Material, einschließlich des Eileiters, ab, bis nur noch der Eierstock übrig bleibt. Übertragen Sie dann jeden Eierstock mit einer gebogenen Pipette in die Vertiefung einer vorbereiteten Platte.