Gießen von Gallensystemharz: Eine Technik zur Analyse der 3D-Architektur des Gallensystems im Mausmodell unter Verwendung von röntgendichter Harzinjektion

Das Gallensystem besteht aus der Leber, der Gallenblase und einem Netzwerk von Gängen, die sich zum gemeinsamen Gallengang oder C-B-D verbinden, der die Galle zum Darm transportiert.

Nehmen Sie für den Harzguss des Gallensystems eine Maus, die perfundiert wurde, um Blut aus der Leber und der Gallenblase zu entfernen.

Platzieren Sie die Maus in Rückenlage.

Visualisieren Sie die Bauchhöhle unter einem Dissektionsmikroskop, um die viszerale Oberfläche der Leber zu lokalisieren und den Schließmuskel von Oddi zu identifizieren - eine Muskelschicht, die am distalen Ende des CBD vorhanden ist, bevor es in den Darm gelangt.

Machen Sie einen schrägen Schnitt im CBD neben dem Schließmuskel von Oddi.

Führen Sie einen Schlauch in das CBD ein. Verbinden Sie das andere Ende des Schlauchs mit einer Spritze, die eine farbige und röntgendichte Harzsuspension enthält.

Injizieren Sie die Harzsuspension in den Kanal.

Das Harz gelangt aus dem CBD in das Netzwerk kleinerer Gallengänge und breitet sich schließlich in der Leber und der Gallenblase aus. Die Ausbreitung kann verfolgt werden, indem die Bewegung von farbigem Harz durch die Enden kleiner Kanäle visualisiert wird.

Entfernen Sie den Schlauch und lassen Sie das Harz polymerisieren.

Erhalten Sie die Mikro-CT-Bilder der Kanäle. Da das Harz röntgendicht ist, lässt es keine Röntgenstrahlen durch, was einen Kontrast zum Gallensystem darstellt und bei der Analyse seiner 3D-Architektur hilft.

Bevor Sie Harz in das Gallensystem der Maus injizieren, beginnen Sie, den Darm und die Bauchspeicheldrüse mit einem Wattestäbchen, das mit PBS benetzt ist, auf die linke Seite der Maus zu bewegen, um den gemeinsamen Gallengang und die Pfortader freizulegen. Machen Sie dann einen kleinen Querschnitt in der unteren Hohlvene. Drehen Sie die ventrale Seite der Leber in Richtung Herz, um die viszerale Oberfläche und die hiläre Region freizulegen, und lokalisieren Sie den gemeinsamen Gallengang, der von der hilären Region über die Bauchspeicheldrüse in den Darm am Schließmuskel von Oddi verläuft. Verwenden Sie die gerade Pinzette, um den umgebenden Gewebebereich von etwa 5 Millimetern vom gemeinsamen Gallengang zu befreien.

Legen Sie dann einen Seidennahtfaden unter den Gallengang und binden Sie einen losen Überhandknoten um den Gallengang. Halten Sie die Federschere flach gegen den gemeinsamen Gallengang, um einen schrägen Schnitt am gemeinsamen Gallengang an der Stelle zu machen, an der der gemeinsame Gallengang in die Bauchspeicheldrüse und den Darm eintritt, neben dem Schließmuskel von Oddi. Mischen Sie anschließend 1 Milliliter des gelben Harzes mit 50 Mikrolitern des MV-Härters und füllen Sie eine 1-Milliliter-Luer-Spritze mit der Harz-Härter-Mischung.

Verbinden Sie die gefüllte Spritze mit dem Schlauchset #1 und drücken Sie den Kolben, um den Schlauch zu füllen, bis das Harz-Härter-Gemisch von der Spitze des Schlauchs tropft. Bewege mit der Pinzette den Bereich um den Schnitt des Gallengangs, bevor du den Schlauch in die Öffnung im Gallengang einführst, wobei die längste Kante der abgeschrägten Spitze nach unten zur dorsalen Seite des Gallengangs zeigt. Ziehen Sie dann den Seidenfadenknoten fest, um den Schlauch im gemeinsamen Gallengang zu sichern.

Nach der Injektion des Harzes in den Gallengang communis ist die Gallenblase und die einzelnen Leberlappen zu beobachten. Massieren Sie die Leber mit einem PBS-benetzten Wattestäbchen, um das Harz gleichmäßig zu verteilen. Die Endäste der mit Harz gefüllten Gallengänge sind an der Leberoberfläche schwach sichtbar. Beenden Sie die Injektion des Harzes, wenn Harzpunkte an der Oberfläche der Leber erscheinen oder wenn ein Widerstand erreicht ist. Entfernen Sie dann den Schlauch, indem Sie ihn aus dem gemeinsamen Gallengang herausziehen, und ziehen Sie den Seidenknoten schnell mit einer Pinzette fest, um zu verhindern, dass das Harz austritt.