Modellierung eines photothrombotischen Schlaganfalls im Mausmodell: Eine Laserbeleuchtungstechnik durch den Schädel der Maus nach Verabreichung von lichtempfindlichem Farbstoff zur Induktion von Photothrombose

Stabilisieren Sie zunächst eine anästhesierte Maus in einer stereotaktischen Einheit. Schließen Sie eine Sonde an, um die Temperatur der Maus zu überwachen. Regulieren Sie die Körpertemperatur mit einem Heizkissen.

Als nächstes sterilisieren Sie die Operationsstelle und machen einen Längsschnitt, um den Schädel freizulegen.

Kratzen Sie das darunterliegende Periost – eine Bindegewebsschicht von der Schädeloberfläche – ab.

Identifizieren Sie die koronale Naht und markieren Sie die interessierende Position vom Bregma aus - dem Schnittpunkt der koronalen und sagittalen Naht.

Befestigen Sie ein Klebeband mit einer kleinen Öffnung auf dem markierten Bereich, um den belichteten Bereich während der Laserbeleuchtung einzuschränken. Injizieren Sie nun den gewünschten lichtempfindlichen Farbstoff in die Bauchhöhle der Maus.

Die injizierten Farbstoffmoleküle wandern durch das Kreislaufsystem und erreichen das Gehirn.

Positionieren Sie anschließend die entsprechende Laserquelle über dem markierten Bereich und beleuchten Sie den Bereich für die gewünschte Dauer. Nach der Beleuchtung wird der zirkulierende Farbstoff aktiviert und erzeugt hochreaktive Sauerstoffspezies. Diese wirken, indem sie die Endothelzellmembranen in den Blutgefäßen im beleuchteten Bereich schädigen.

Die Schädigung der Endothelzellen fördert die lokale Aktivierung und Aggregation von Blutplättchen und die anschließende Thrombenbildung, wodurch der lokale zerebrale Blutfluss unterbrochen wird. Danach rehydrieren Sie den Schädel mit Kochsalzlösung. Schließen Sie den chirurgischen Schnitt und setzen Sie die Maus wieder in ihren Käfig ein.

Die Unterbrechung des zerebralen Blutflusses schädigt das Hirngewebe, was bei der Maus zu einer Funktionsstörung des Gehirns führt.

Messen Sie das Körpergewicht der Maus, um die Dosis von Rose Bengal anzupassen, die injiziert werden soll. Stellen Sie das zugehörige Feedback-gesteuerte Heizkissen so ein, dass die Körpertemperatur der Maus gehalten wird. Sobald die Maus vollständig anästhesiert und im stereotaktischen Rahmen fixiert ist, führen Sie die rektale Sonde vorsichtig ein, um die Körpertemperatur der Maus während des gesamten chirurgischen Eingriffs zu überwachen. Tragen Sie die Dexpanthenol-Augensalbe auf beide Augen auf und reinigen Sie die Haut und das umliegende Fell mit einem Desinfektionsmittel.

Verwenden Sie eine Schere, um einen einzelnen Längsschnitt von 2,0 bis 2,5 Zentimetern zu machen, und ziehen Sie ihn zurück, um den Schädel freizulegen. Verwenden Sie Watte, um das Periost vorsichtig zu entfernen, und lokalisieren Sie die koronalen Nähte. Tragen Sie beim Einschalten des 561-Nanometer-Lasers eine Schutzbrille und markieren Sie das Bregma +3 Millimeter nach links. Schalten Sie dann den Laser aus und haken Sie den Aufkleber mit einem Loch mit einem Durchmesser von 4 Millimetern in die markierten Koordinaten ein.

Injizieren Sie der Maus intraperitoneal Rose Bengal. Platzieren Sie den Laserstrahl in einem Abstand von 4 bis 5 Zentimetern zum Schädel. Schalten Sie den Laser ein und beleuchten Sie den Schädel 20 Minuten lang. Rehydrieren Sie den Schädel, indem Sie zwei Tropfen 0,9% Kochsalzlösung auftragen. Legen Sie die Maus nach dem Nähen der Wunde in eine Aufwachkammer bei 37 Grad Celsius, um sich von der Narkose zu erholen. Setzen Sie die Maus nach einer Stunde wieder in den Käfig in einem klimatisierten Raum ein.