Isolierung von Sinusknoten aus Mausmodell: Ein Verfahren zur Gewinnung von SA-Knoten aus dem Mausherz

Im Herzen enthält der Sinusknoten oder S-A-Knoten spezialisierte Muskelzellen, die kontinuierlich elektrische Impulse im gesamten Herzen initiieren und verbreiten und so die Frequenz des Herzschlags bestimmen.

Um den S-A-Knoten zu isolieren, bereiten Sie zunächst eine mit Antikoagulanzien behandelte euthanasierte Maus in Rückenlage vor. Die Behandlung mit Antikoagulanzien hilft, Blutgerinnsel zu verhindern und so eine effiziente Gewebeisolierung zu gewährleisten.

Machen Sie als Nächstes einen queren Hautschnitt und schneiden Sie anschließend die Seitenwände des Brustkorbs, um Zugang zum Inhalt der Brusthöhle zu erhalten und das darunter liegende Herz freizulegen.

Hydratisieren Sie das Herz mit einem gerinnungshemmenden Puffer. Entferne die Lunge zusammen mit der Luftröhre.

Durchtrennen Sie die großen Blutgefäße, um das Herz aus der Brusthöhle zu entfernen. Übertragen Sie das herausgeschnittene Herz in eine pufferhaltige, mit Silikon-Elastomer ausgekleidete Schale, um das empfindliche Organ zu behandeln.

Sichern Sie die Spitze des Herzens. Lokalisieren Sie nun die Position der unteren und oberen Hohlvene im rechten Vorhof. Identifizieren Sie ferner die Position des S-A-Knotens innerhalb des Gewebepflasters zwischen den Hohlvenen.

Entfernen Sie die Spitze, um das Blut aus dem Herzen abzulassen. Trennen Sie nun die Vorhöfe von den Herzkammern. Entlang des interatrialen Septums schneiden, um den linken Vorhof zu entfernen. Legen Sie den rechten Vorhof flach und entfernen Sie das S-A-Knotengewebe.

Beginnen Sie damit, die Haut der euthanasierten Maus mit einem Hämostaten zu halten, und verwenden Sie eine chirurgische Schere, um einen Querschnitt in die Haut zu machen, direkt unter der Unterseite des Brustkorbs vom linken Rippenbogen zum rechten Rippenbogen. Verwenden Sie eine chirurgische Schere, um das Bauchfell aufzuschneiden, und trennen Sie vorsichtig die Leber vom Zwerchfell. ohne die Leber zu verletzen, um übermäßige Blutungen zu vermeiden.

Schneiden Sie das Zwerchfell entlang des Thorax ein, um die Brusthöhle freizulegen. Schneiden Sie mit der chirurgischen Schere die Seitenwände des Brustkorbs von den Rändern der Rippenbögen bis zu den Schlüsselbeinen auf, um das Herz freizulegen. Verwende dann eine 23-Gauge-Spritzennadel, um den Brustkorb über die Schulter zu stecken.

Verwenden Sie eine Transferpipette, um die warme, heparinisierte Complete Tyrode-Lösung auf das Herz zu tropfen, um es feucht zu halten. Halten Sie die Lunge mit einer extra feinen Graefe-Pinzette fest und durchtrennen Sie die Luftröhre mit einer chirurgischen Schere, um die Lunge zu entfernen. Um das Herz zu entfernen, halten Sie die Herzspitze mit einer extra feinen Graefe-Zange fest und schneiden Sie die Aorta und die untere Hohlvene mit einer chirurgischen Schere auf.

Übertragen Sie das Herz in eine Petrischale, die ein ausgehärtetes Silikonelastomer enthält, und verwenden Sie eine Transferpipette, um das Herz mit 2 bis 3 Millilitern warmer heparinisierter Complete Tyrode-Lösung zu baden. Befestigen Sie die Spitze des Herzens mit einer Seziernadel an der Schale.

Halten Sie die untere Hohlvene mit einer Dumont #2 Laminektomie-Pinzette. Führen Sie eine 22-Gauge-Spritzennadel durch die untere und obere Hohlvene ein, um ihre Position im rechten Vorhof zu lokalisieren, der auch die ungefähre Position des Sinusknotens identifiziert.

Halten Sie das rechte Vorhofohr mit einer Dumont #2 Laminektomie-Pinzette fest und führen Sie einen Präparierstift durch das rechte Vorhofohr ein, um es an Ort und Stelle zu halten. Wiederholen Sie den gleichen Vorgang für das linke Vorhofohr. Entfernen Sie dann die Spritzennadel, die die Hohlvene überspannt.

Verwenden Sie eine Castroviejo-Schere, um die Spitze des Herzens zu entfernen, indem Sie einen Querschnitt durch die Ventrikel machen oder das Blut aus dem Herzen ablassen. Waschen Sie dann das Herz, indem Sie warme, heparinisierte Complete Tyrode's Solution hinzufügen. Schneiden Sie mit einer Castroviejo-Schere entlang des atrioventrikulären Septums, bis die Vorhöfe von den Ventrikeln getrennt sind, und halten Sie den Schnitt näher am Ventrikel.

Entlang des interatrialen Septums schneiden, um den linken Vorhof zu entfernen. Platzieren Sie die Präparierstifte in der Peripherie des rechten Vorhofs, damit er flach liegt. Entfernen Sie mit der Castroviejo-Schere restliches Fett, Gefäße oder Gewebe aus dem Vorhof und lokalisieren Sie den Sinusknoten im rechten Vorhof.