Extraktion eines Netzhautbechers aus der Maus: Ein chirurgischer Eingriff zur Gewinnung eines intakten Netzhautbechers aus einem Mausauge

Das Mausauge ist von drei Schichten bedeckt: der äußersten fibrösen Sklera, der mittleren Aderhaut und der innersten Netzhaut. Der becherförmige Hohlraum zwischen Netzhaut und Augenlinse enthält Glaskörper – ein gallertartiges Medium, das hilft, Licht auf die Netzhaut zu übertragen, während die Netzhaut wiederum die resultierenden visuellen Informationen über den Sehnerv an das Gehirn weiterleitet.

Um den Netzhautbecher zu extrahieren, nehmen Sie eine euthanasierte Maus und enukleieren Sie ihr Auge. Tauchen Sie das Auge in eine Petrischale, die einen geeigneten eiskalten Puffer enthält, um einen Gewebeabbau zu verhindern. Stellen Sie die Petrischale unter ein Seziermikroskop.

Schneide die Reste des Sehnervs von der Basis des Augapfels ab. Machen Sie einen kleinen Schnitt an der Verbindungsstelle zwischen Netzhaut und Hornhaut – eine durchsichtige Abdeckung um die Augenlinse. Machen Sie mit dieser Öffnung einen vollständigen kreisförmigen Schnitt entlang des Netzhaut-Hornhaut-Übergangs, um die Linse und das Glaskörpergel vom Auge zu lösen.

Entfernen Sie die Linse und den Glaskörper, um eine halbkreisförmige Augenmuschel zu erhalten, die die von Aderhaut und Sklera ausgekleidete Netzhaut enthält. Mache mehrere oberflächliche Schnitte im gesamten skleralen Teil der Augenmuschel. Verwenden Sie diese Schnitte, um die äußeren Augenschichten zu trennen, um eine intakte Netzhautschale für nachfolgende Anwendungen zu erhalten.

Entkernen Sie die Augen einer erwachsenen euthanasierten Maus und legen Sie sie in eine eiskalte PBS in einer Petrischale, dann legen Sie die Petrischale unter ein Seziermikroskop. Schneiden Sie mit einer Mikroschere den Sehnerv ab und entfernen Sie dann vorsichtig die zusätzlichen Rektusmuskeln, die außerhalb des Augapfels befestigt sind.

Stanzen Sie mit einer 30-Gauge-Nadel ein Loch in den Rand der Hornhaut. Machen Sie dann mit einer Mikroschere mit feiner Dissektion einen kreisförmigen Schnitt entlang des Randes der Hornhaut. Entfernen Sie mit einer scharfen Präparierzange die Hornhaut, die Linse und den Glaskörper aus der Augenmuschel. Machen Sie mehrere kleine Schnitte an der Skleraschicht am Rand der Augenmuschel mit einer feinen Präparier-Mikroschere. Halten Sie das Skleralgewebe auf jeder Seite mit zwei scharfen Präparierzangen fest und ziehen Sie sehr vorsichtig an der Skleralschicht, um sie von der Neuralnetzhaut zu entfernen. Wiederholen Sie dies um die Augenmuschel herum, bis alle Sklera entfernt ist und eine intakte Netzhautschale erhalten wird.