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Harnwegsinfektionen (HWI) werden hauptsächlich durch die Besiedlung der Nieren, Harnleiter, der Blase oder der Harnröhre durch uropathogene E. coli-Bakterien verursacht.
Um ein HWI-Mausmodell zu generieren, platzieren Sie zunächst eine anästhesierte Maus in Rückenlage. Visualisieren Sie mit einem Stereomikroskop die untere Bauchregion der Maus, um die tiefrosa Harnröhrenöffnung zu lokalisieren.
Nehmen Sie nun eine Spritze mit der gewünschten uropathogenen Bakterienlösung, an der eine Angiokatheterspitze befestigt ist. Führen Sie den Katheter senkrecht in die Harnröhre ein. Kippen Sie die Spritze, um sie horizontal zu positionieren, und schieben Sie sie weiter, bis sie die Harnblase erreicht.
Träufeln Sie dann langsam das bakterielle Inokulum in die Blase. Halten Sie die Spritze und den Katheter für die gewünschte Dauer an Ort und Stelle, um ein Auslaufen zu vermeiden. Ziehen Sie den Katheter langsam aus der Harnröhre zurück und lassen Sie die Bakterien sich vermehren.
Sobald sie sich im Inneren befindet, dringt die Bakterienpopulation in die oberflächlichen Blasenepithelzellen ein, wo sie sich repliziert, um intrazelluläre Bakteriengemeinschaften (IBCs) im Zytoplasma dieser Zellen zu bilden.
Schließlich werden diese Bakterien in das Blasenlumen freigesetzt, wo sie die nahe gelegenen Zellen infizieren und die Ausbreitung der Infektion verursachen.
Das UTI-Mausmodell ist nun bereit für die weitere nachgelagerte Analyse.
Montieren Sie eine sterile 24-Gauge-Angiokatheterspitze auf eine 100-Mikroliter-Spritze. Füllen Sie die Spritze mit der vorbereiteten Bakterienlösung. Legen Sie ein Tier in Rückenlage auf eine Arbeitsfläche und halten Sie eine stabile Isofluran-Anästhesie aufrecht, indem Sie während der Instillation einen Nasenkonus verwenden. Tragen Sie die Augensalbe auf. Scheiden Sie den Restharn aus, indem Sie sanft zusammendrücken und kreisende Bewegungen auf der suprapubischen Region ausführen. Reinigen Sie dann den Unterbauch mit 70% Ethanol.
Schmieren Sie die Katheterspitze mit normaler Kochsalzlösung. Lege den Zeigefinger der nicht dominanten Hand auf den Bauch und schiebe ihn sanft nach oben. Beginnen Sie die Katheterisierung der Harnröhre vertikal in einem 90-Grad-Winkel. Sobald Sie auf einen Widerstand stoßen, kippen Sie ihn horizontal, bevor Sie ihn weiter einsetzen. Führen Sie eine langsame Instillation von 50 Mikrolitern des bakteriellen Inokulums durch. Lassen Sie die Spritze und den Katheter nach der Instillation noch einige Sekunden an Ort und Stelle und ziehen Sie sie dann langsam zurück, um ein Auslaufen zu verhindern.