Maus-Ileumschleifenmodell: Ein chirurgisches Modell zur Untersuchung der Darmpermeabilität bei der Maus

Unter pathologischen Bedingungen erhöht der Zerfall der Epithel- und Endothelbarriere die Darmpermeabilität, wodurch der Darminhalt in das umliegende Gefäßsystem und die Bauchhöhle gelangt. Die intestinale Permeabilität kann mit Hilfe des Ileumschleifenmodells simuliert werden.

Bereiten Sie zunächst eine betäubte Maus in Rückenlage vor. Mache einen Schnitt in der Mittellinie im Bauch. Legen Sie eine sterile Baumwollgaze, die mit einem geeigneten Puffer angefeuchtet ist, über den Operationsbereich, um die Organe während der Operation mit Feuchtigkeit zu versorgen.

Äußere das Ileum – den distalen Teil des Darms – und verteilen Sie es über die Gaze, um das Mesenterium freizulegen. Identifizieren Sie zwei Ligaturstellen im Ileum, die in angemessenem Abstand im Mesenterium liegen und keine kritischen Blutgefäße aufweisen. Durchstechen Sie dann das Mesenterium, um Ligaturen an den identifizierten Stellen hinzuzufügen.

Als nächstes wird das Ileum präpariert, um eine isolierte Ileumschleife mit intakter Blutversorgung und Mesenterialmembran zu erzeugen. Injizieren Sie anschließend einen geeigneten Puffer in den Kreislauf, um den Abfallinhalt zu spülen.

Ligatieren Sie nun die offenen Enden der Ileumschleife. Verwende eine Spritze, um Chemovin – eine chemotaktische Proteinsuspension – in die Schleife zu injizieren, wodurch sie sich aufbläht. Bringen Sie die Organe wieder in den Bauch zurück.

Nähen Sie den Schnitt. Lassen Sie die Maus wiederherstellen. Schließlich gelangen die Chemokinmoleküle durch die Ileumwand in die angrenzenden Blutgefäße, was zu Entzündungen und Leukozyteneinstrom führt.

Nachdem Sie eine chirurgische Anästhesieebene erreicht haben, beginnen Sie damit, das Fell der Bauchmittellinie mit Alkoholtupfern oder einem mit 70% Ethanol getränkten Mullschwamm zu schrubben. Befeuchten Sie eine große Fläche des Fells nicht mit Alkohol, um eine Unterkühlung zu vermeiden. Führen Sie mit einer Schere eine Mittellinien-Laparotomie durch. Machen Sie einen horizontalen Schnitt in der Mitte des Bauches und legen Sie das Peritoneum frei, wobei Sie darauf achten, dass die intraabdominalen Organe nicht verletzt werden.

Legen Sie vorgeschnittene nasse Baumwollgaze über die freiliegende intraabdominale Höhle. Verwenden Sie feuchte Wattestäbchen, um den Blinddarm zu mobilisieren und nach außen zu verkörpern, und legen Sie ihn vorsichtig auf feuchte Wattegaze. Mobilisieren Sie dann das Ileum und äussern es sanft nach außen. Setzen Sie mindestens 6 Zentimeter terminales Ileum auf die nasse Baumwollgaze ein, ohne die Mesenterialgefäße und die Blutversorgung zu stören.

Halten Sie das freiliegende Gewebe jederzeit mit warmem HBSS feucht. Identifiziere die Hauptarterie, die das Ileum versorgt, im Mesenterium in der Nähe des Blinddarms. Suchen Sie dann zwei Ligaturstellen im Mesenterium, die frei von kritischen Blutgefäßen sind. Fassen Sie das terminale Ileum mit einer stumpfen Gewebezange fest an und verwenden Sie eine Pinzette mit feiner Spitze, um das Mesenterium zu fenestrieren, um Blutgefäße zu vermeiden.

Legen Sie eine Seidennaht über die Perforation und binden Sie einen chirurgischen Knoten, um die erste Ligatur zu erzeugen. Messen Sie mit dem Lineal 4 Zentimeter von der ersten Ligatur entfernt und erstellen Sie die zweite Ligatur. Schneiden Sie vorsichtig mit einer feinen Schere neben jede Ligatur, um die 4 Zentimeter lange Ileumschlinge zu isolieren, wobei die Blutversorgung und die Mesenterialmembran intakt bleiben.

Spülen Sie den Inhalt des Ileumschleifensegments vorsichtig mit warmem HBSS mit einer flexiblen gelben Ernährungssonde, die an einer 10-Milliliter-Spritze befestigt ist. Achten Sie darauf, den luminalen Inhalt aus der Bauchhöhle zu spülen, um die Operationsstelle sauber zu halten. Die beiden abgeschnittenen Enden der geröteten Ileumschlaufe mit einer Seidennaht verschließen.

Verwenden Sie eine 1-Milliliter-Spritze mit einer 30-Gauge-Nadel, um langsam 250 Mikroliter Reagenz wie FITC-Dextrane oder Chemokin in das Darmlumen zu injizieren. Die Ileumschlinge bläht sich auf, was zu einer mäßigen Dehnung der Schleimhaut führt.

Verschließen Sie die Bauchdecke mit einem Nadelhalter, einer anatomischen Pinzette und 3.0 nicht resorbierbaren Seidennähten mit einer umgekehrten Schnittnadel. Nachdem Sie das Tier getrocknet haben, um eine Unterkühlung zu vermeiden, legen Sie es für die Inkubationszeit in eine temperaturgeregelte Anästhesiekammer.