Generierung eines proximalen Dickdarmschleifenmodells der Maus: ein chirurgisches Verfahren zur Erzeugung einer proximalen Dickdarmschleife und zur Messung der intestinalen Permeabilität durch Nachweis von Fluoreszenzmarkern im Serum nach intraluminaler Injektion

Bei pathologischen Zuständen führt eine gestörte Darmepithelbarriere zu einer erhöhten Permeation von schädlichen luminalen Inhalten in den systemischen Kreislauf, was zu einer erhöhten systemischen Entzündung führt.

Um die intestinale Permeabilität durch Erzeugung einer intestinalen proximalen Colon Loop oder eines pcLoop-Modells zu beurteilen, bereiten Sie eine anästhesierte Maus in Rückenlage vor. Führen Sie einen Bauchschnitt in der Mittellinie durch. Äußere sanft den Blinddarm, das terminale Ileum und das proximale Dickdarm und legen Sie es über die feuchte Gaze, um die Hydratation der Organe aufrechtzuerhalten.

Lokalisieren Sie das Mesokolon des proximalen Dickdarms – membranöse Falten des Peritoneums, die Blutgefäße enthalten. Identifizieren Sie zwei ausreichend voneinander entfernte Stellen im Mesokolon, die frei von Blutgefäßen sind, distal vom Blinddarm, um ligiert zu werden. Perforieren Sie die Stellen.

Erstellen Sie die Ligatur an den ausgewählten Stellen und nehmen Sie Schnitte in der Nähe der ligierten Stellen vor, um ein pcLoop-Segment zu isolieren, ohne die Blutversorgung zu stören. Spülen Sie das Segment mit Puffer, um Fäkalien zu entfernen.

Binden Sie die abgeschnittenen Enden des gespülten Segments chirurgisch zusammen. Injizieren Sie die gewünschte Fluoreszenzmarkerlösung in das Lumen des Dickdarmsegments. Bringen Sie die Organe wieder in die Bauchhöhle zurück. Schließen Sie den chirurgischen Schnitt und lassen Sie die Maus sich erholen.

Nach der Injektion ermöglicht eine verminderte Integrität der Darmbarriere einen erhöhten parazellulären Transport der fluoreszierenden Markermoleküle aus dem Darmlumen in den Blutkreislauf, der in der Serumfraktion des Blutes nachgewiesen werden kann, um die Darmpermeabilität zu messen.

Bereiten Sie die Maus für die Operation vor und äussern Sie den Blinddarm. Äußere mit feuchten Wattestäbchen das gesamte Ileum und lege es auf eine feuchte Wattegaze. Identifizieren Sie den proximalen Dickdarm in der Blutversorgung, die sich im Mesokolon befindet. Mobilisieren Sie den proximalen Dickdarm und legen Sie die erste Ligatur in einem gefäßfreien Bereich im Mesokolon an, etwa 0,5 Zentimeter vom Blinddarm entfernt.

Messen Sie 2 Zentimeter von der ersten Ligatur entfernt und erstellen Sie eine zweite Ligatur an einer Stelle, die frei von Blut im Mesokolon ist. Schneiden Sie mit einer feinen Schere vorsichtig neben jeder Ligatur, um einen 2 Zentimeter langen pcLoop zu isolieren.

Spülen Sie den pcLoop vorsichtig mit warmem HBSS, um den Kot mit einer flexiblen gelben Ernährungssonde zu entfernen, die an einer 10-Milliliter-Spritze befestigt ist. Achten Sie darauf, den luminalen Inhalt aus der Bauchhöhle zu spülen, um die Operationsstelle sauber zu halten. Ligatieren Sie dann die beiden abgeschnittenen Enden des gespülten pcLoop mit Seidennaht.

Verwenden Sie eine 1-Milliliter-Spritze mit einer 30-Gauge-Nadel, um langsam 200 Mikroliter Reagenz wie FITC-Dextrane oder Chemokin in das Darmlumen zu injizieren. Der pcLoop bläst sich auf, was zu einer mäßigen Dehnung der Schleimhaut führt. Verwenden Sie feuchte Wattestäbchen, um den ligierten pcLoop, das Ileum und den Blinddarm vorsichtig wieder einzusetzen. Verschließen Sie die Bauchdecke mit einem Nadelhalter, einer anatomischen Pinzette und 3.0 nicht resorbierbaren Seidennähten mit einer umgekehrten Schnittnadel.