0 Aufrufe • 3:53 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer euthanasierten Maus in Rückenlage. Sterilisieren Sie seine Hintergliedmaßen. Entfernen Sie operativ die Haut und die Faszien – eine dünne Hülle aus Bindegewebe unter der Haut –, um die darunter liegenden Muskeln der Hintergliedmaßen freizulegen.
Lokalisieren Sie den Musculus tibialis anterior oder TA auf der lateralen Seite der Tibia. Halten Sie die distale TA-Sehne fest und lösen Sie den Muskel vom darunter liegenden Gewebe. Schneiden Sie den Muskel in der Nähe des Knies, um den TA-Muskel zu entfernen, und legen Sie den darunter liegenden Musculus extensor digitorum longus oder EDL frei, der sich im vorderen Kompartiment der Hintergliedmaße befindet.
Schnitten Sie die distale EDL-Sehne ein und ziehen Sie den EDL-Muskel in Richtung Knie. Schneiden Sie die proximale EDL-Sehne ab, um den EDL-Muskel zu entfernen. Den entnommenen Muskel in ein Röhrchen mit vorgewärmtem Medium mit Kollagenase-Enzymen geben und für die entsprechende Dauer inkubieren. Kollagenasen bauen das Bindegewebe ab, das jede Muskelfaser oder Myofaser innerhalb des Muskels umgibt. Durch diesen Verdauungsschritt werden die Myofasern aus der inneren Schicht des Muskels gelöst.
Nach der Inkubation wird der verdaute Muskel vorsichtig auf eine Multi-Well-Platte mit vorgewärmtem Medium übertragen, um die Überlebensrate der Myofasern zu erhöhen. Übertragen Sie die Platte auf den beheizten Tisch eines Stereomikroskops. Zerreiben Sie nun den verdauten Muskel vorsichtig, um die einzelnen Myofasern zu dissoziieren und in die Lösung freizusetzen.
Die isolierten EDL-Myofasern können für weitere nachgelagerte Analysen verwendet werden.
Besprühen Sie alle Geräte und die Hinterbeine der Maus mit 70% Ethanol. Verwenden Sie eine gehärtete, fein gebogene Schere und eine feine Pinzette, um die Haut zu entfernen und die darunter liegenden Muskeln freizulegen. Entfernen Sie mit der fein gekrümmten Pinzette die umgebende Faszie, ohne die darunterliegende Muskulatur zu beschädigen.
Um den Tibialis anterior oder TA zu entfernen, fassen Sie die distale TA-Sehne mit einer Pinzette und schneiden Sie sie mit einer feinen Schere ab. Während Sie den TA an der Sehne halten, ziehen Sie ihn in Richtung Knie und schneiden Sie den Muskel in der Nähe des Knies, um den EDL-Muskel freizulegen.
Heben Sie die distale EDL-Sehne mit einer gebogenen Pinzette an und schneiden Sie sie mit einer feinen Vannas Federschere. Legen Sie die proximale EDL-Sehne frei, indem Sie die EDL vorsichtig in Richtung Knie ziehen. Schneiden Sie dann die proximale Sehne mit einer Schere auf. Inkubieren Sie die EDL-Muskeln im Reaktionsröhrchen bei 37 Grad Celsius in einem zirkulierenden Wasserbad. Stoppen Sie die Verdauung, wenn sich die Muskeln lockern und einzelne Herzmuskelfasern sichtbar sind.
Arbeiten Sie unter einem Stereo-Binokularmikroskop, das mit einer Heizplatte ausgestattet ist, und spülen Sie die Muskeln mit der Pipette mit großem Durchmesser mit warmem Isolationsmedium aus. Dissoziieren Sie die Muskeln mit der Pipette mit großem Durchmesser, bis die gewünschte Anzahl von Myofasern frei in der Lösung schwimmt.