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Bakterielle Endophthalmitis ist eine entzündliche Augeninfektion, die auf eine intraokulare Invasion von Bacillus cereus-Bakterien zurückzuführen ist.
Um eine bakterielle Endophthalmitis in einem Mausmodell zu erzeugen, platzieren Sie eine anästhesierte Maus seitlich auf dem Operationsbrett. Klemmen Sie die periokulare Haut ein, um den Augapfel zu verschieben und die Limbusregion zu lokalisieren – einen Schnittpunkt von Sklera und Hornhaut im Auge.
Nehmen Sie eine Nadel, die mit der Bacillus cereus-Kultursuspension vorgefüllt ist. Führen Sie die Nadel am Limbus ein und stechen Sie durch den mittleren Glaskörperbereich. Als nächstes injizieren Sie die Bakteriensuspension intravitreal und geben die Bakterien in die Glaskörperhöhle des Auges ab.
Entfernen Sie nun die Nadel und lassen Sie den Augapfel wieder seine natürliche Position einnehmen. Setzen Sie die Maus in einen Käfig und überwachen Sie die Ausbreitung der bakteriellen Infektion. Sobald sie sich im Inneren befinden, vermehren sich die Bakterien schnell und nehmen an Zahl zu. Anschließend wandern diese Bakterien mit ihren Flagellen in Richtung Netzhaut.
Beim Erreichen des vitreoretinalen Raums scheiden Bakterien Toxine und Enzyme aus, die ihnen helfen, in die Netzhaut einzudringen. Im Inneren der Netzhaut aktivieren bakterielle Hüllproteine die retinalen Müllerzellen und produzieren Entzündungsmediatoren, um Entzündungszellen zu rekrutieren, die die empfindlichen Netzhautzellen schädigen. Schließlich führt ein Einstrom von Entzündungszellen in das Innere des Auges zu einer Endophthalmitis im Mausauge.
Schalten Sie für die intravitreale Injektion den Mikroinjektor ein und öffnen Sie das Gasventil am Druckluftbehälter, der an den Mikroinjektor angeschlossen ist. Drücken Sie auf "Modus" am Injektor, bis auf dem Bildschirm "Balance" angezeigt wird. Drücken Sie auf "Balance" und legen Sie die Computermaus auf den Operationstisch. Verbinden Sie den Pipettenhalter aus Edelstahl mit dem Schlauch, der am "Fill/Output" am Injektor befestigt ist, und schrauben Sie den Pipettenhalterstecker fest um eine abgeschrägte Glaskapillarnadel für die Pipettenspitze, damit die Kapillarnadel in das andere Ende des Pipettenhalters eingeführt werden kann.
Schalten Sie das Augenmikroskop ein und stellen Sie die Lichtintensität auf 50 % ein. Positionieren Sie das Mikroskop über der Eingriffsseite und stellen Sie das Mikroskop auf den gewünschten Fokus ein. Nachdem Sie bestätigt haben, dass Sie nicht auf den Pedalreflux reagieren, legen Sie die anästhesierte Maus auf die linke Seite auf die medizinischen Unterlagen, wobei die Nase nach rechts zeigt.
Lokalisieren Sie das rechte Auge durch das ophthalmologische Mikroskopobjektiv und platzieren Sie die Zange einer umgekehrt wirkenden Pinzette auf beiden Seiten des Auges, um die Injektionsstelle freizulegen. Klicken Sie mit der linken Maustaste auf die Maus, die mit dem Mikroinjektor verbunden ist, um die vorbereitete Kapillarnadel mit der verdünnten Bakterienlösung zu füllen, und fixieren Sie den Kopf mit der linken Hand und platzieren Sie die Spitze der Nadel mit der schrägen Seite nach oben am Limbus des Auges.
Mit der Nadel in einem 45-Grad-Winkel stechen Sie das Auge und achten Sie darauf, dass nur 0,5 Millimeter der scharfen Spitze der Nadel eingeführt werden. Sobald die Nadelspitze eingeführt wurde, klicken Sie mit der linken Hand mit der rechten Maustaste auf das Mauspad, um 0,5 Mikroliter der B. cereus-Lösung zu injizieren. Um ein Auslaufen zu verhindern, lassen Sie die Nadelspitze 2 bis 3 Sekunden lang im Mausauge, bevor Sie sie entfernen. Lassen Sie dann die Pinzette los und das Auge geht von selbst zurück in die Augenhöhle. Bringen Sie die Maus in einen Aufwachkäfig auf einem Wärmekissen mit Überwachung bis zum vollständigen Liegen.