Isolierung von IPE- und RPE-Zellen: Eine Technik zur Gewinnung pigmentierter Epithelzellen aus isoliertem Schweineauge
JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 Ansichten • 2:57 Min. • July 8th, 2025
Das Schweineauge enthält eine Population von quaderförmigen Epithelzellen, die zahlreiche Melanosomen enthalten - Organellen, die bei der Lichtabsorption helfen - was zu einem pigmentierten Aussehen dieser Zellen führt. Abhängig von der Lage dieser Zellen werden die unter der Netzhaut vorhandenen Epithelzellen als retinale Pigmentepithelzellen oder RPE-Zellen bezeichnet, und diejenigen, die die Iris auskleiden, werden als Irispigmentepithelzellen oder IPE-Zellen bezeichnet.
Um RPE- und IPE-Zellen zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme eines Schweineauges. Tauchen Sie das Auge in eine geeignete Desinfektionslösung, um alle Mikroben zu entfernen, die an der Augenoberfläche haften.
Entfernen Sie das Auge aus der Desinfektionslösung und machen Sie mit einer Nadel einen kleinen Schnitt in der Nähe der Iris. Verwenden Sie diese Öffnung, um einen vollständigen Umfangsschnitt entlang der Irisgrenze zu machen. Dadurch löst sich der irishaltige vordere Augenabschnitt vom hinteren Augenknollen, der die Netzhaut hat. Entfernen Sie den überschüssigen Teil und geben Sie die Iris und die Augenzwiebel in separate Kulturschalen.
Geben Sie ein geeignetes Nährmedium in die Platte mit der Iris und in den Augenbulbus. Kratzen Sie das Taschentuch ab. Durch die mechanische Kraft werden die Epithelzellen gelockert und an das Medium abgegeben. Aspirieren Sie die abgelösten IPE- und RPE-Zellen. Säen Sie sie in separate Kulturplatten und inkubieren Sie sie bis zur weiteren Verwendung.
Reinigen Sie das restliche Muskelgewebe und die Haut von den Augen, desinfizieren Sie die Augen in einer Lösung auf Jodbasis und spülen Sie sie mit PBS aus.
Um IPE-Zellen zu isolieren, entfernen Sie die Linse und ziehen Sie die Iris heraus, wie gezeigt. Nachdem Sie zwei Iris vorbereitet haben, fügen Sie 1 Milliliter des vollständigen Mediums hinzu und isolieren Sie die Zellen, indem Sie sie mit einer flachen, feuerpolierten Pasteurpipette zerkratzen, dann die Zellen zählen und aussäen. Legen Sie die Platte in den Inkubator.
Um RPE-Zellen zu isolieren, entfernen Sie den Glaskörper und die Netzhaut aus dem hinteren Segment und legen Sie die Zwiebel in eine Petrischale. Füllen Sie die Glühbirne mit 1 Milliliter Komplettmedium. Entfernen Sie mit einer gebogenen, feuerpolierten Pasteurpipette die RPE-Zellen, sammeln Sie die Zellsuspension mit einer 1.000-Mikroliter-Pipette im Kolben und geben Sie sie zur Resuspension in ein 1,5-Milliliter-Röhrchen. Zählen und säen Sie dann die Zellen und inkubieren Sie die Platte, wie zuvor gezeigt.
Übersicht
In diesem Artikel wird die Isolierung von retinalen Pigmentepithelzellen (RPE) und von Iris-Pigmentepithelzellen (IPE) aus Schweineaugen beschrieben. Die Methodik beinhaltet eine sorgfältige Dissektion und Kultivierungstechniken, um diese spezialisierten Zellen für weitere Forschungszwecke zu gewinnen.
Wichtige Studienkomponenten
Bereich der Wissenschaft
- Zellbiologie
- Neurowissenschaften
- Augenheilkunde
Hintergrund
- Schweineaugen enthalten würfelförmige epitheliale Zellen mit Melanosomen.
- Die Pigmentepithelzellen der Retina befinden sich unterhalb der Netzhaut, während die Pigmentepithelzellen der Iris das Irisepithel auskleiden.
- Diese Zellen spielen entscheidende Rollen für das Sehen und die Gesundheit des Auges.
- Die Isolierung dieser Zellen ist für verschiedene experimentelle Anwendungen unerlässlich.
Zweck der Studie
- Eine detaillierte Anleitung zur Isolierung von RPE- und IPE-Zellen bereitstellen.
- Die Forschung zu den Funktionen und Eigenschaften dieser Zellen erleichtern.
- Das Verständnis der okularen Biologie vertiefen.
Verwendete Methoden
- Desinfektion von Schweineaugen zur Entfernung von Oberflächenmikroben.
- Inzision und kreisförmiger Schnitt, um die Iris von der Augenbulbe zu trennen.
- Mechanisches Abkratzen, um epitheliale Zellen in das Kulturmedium freizusetzen.
- Inkubation der isolierten Zellen für weitere Experimente.
Hauptergebnisse
- Erfolgreiche Isolierung von RPE- und IPE-Zellen aus Schweineaugen.
- Die Zellen wurden kultiviert und für weitere Analysen vorbereitet.
- Die Methodik zeigte ihre Wirksamkeit bei der Gewinnung lebensfähiger Zellen.
- Das Protokoll kann für ähnliche Studien repliziert werden.
Schlussfolgerungen
- Die beschriebenen Methoden sind zuverlässig zur Isolierung von RPE- und IPE-Zellen.
- Diese Forschung leistet einen Beitrag zum Gebiet der okularen Zellbiologie.
- Zukünftige Studien können auf diesen Techniken für verschiedene Anwendungen aufbauen.
Häufig gestellte Fragen
Ausschlaggebende Bedeutung für die Industrie
Die zuverlässige Isolierung primärer pigmentierter Epithelzellen aus Schweineaugen ermöglicht die Entwicklung krankheitsrelevanter In-vitro-Modelle für die Augenforschung und die Bewertung regenerativer Therapien. Diese Fähigkeit unterstützt die Validierung von Wirkstoffzielen in frühen Entwicklungsstadien sowie die mechanistische Risikominderung für Gentherapie- und zellbasierte Behandlungsstrategien. Die Methode bietet eine reproduzierbare Grundlage für translationale Studien in der ophthalmologischen Wirkstoffforschung.
Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung und -Entwicklung
Frühe Entdeckung und Zielvalidierung
- Ermöglicht die Untersuchung der Biologie pigmentepithelialer Zellen in einem kontrollierten ex vivo-System.
- Unterstützt die mechanistische Risikominderung bei der Validierung okularer Zielstrukturen und der Analyse von Signalwegen.
- Erleichtert die Vorhersagbarkeit und Vertrauensbildung bei regenerativen und gentherapeutischen Ansätzen.
Screening und Assay-Entwicklung
- Ermöglicht standardisierte Primärzellkulturen für die Assay-Entwicklung und die Wirkstoff-Screening.
- Stellt Reproduzierbarkeit und Skalierbarkeit für funktionelle Nachfolgeuntersuchungen sicher.
- Ermöglicht die quantitative Beurteilung zellulärer Reaktionen auf genetische oder pharmakologische Eingriffe.
Translationale und präklinische Forschung
- Etabliert zelluläre Modelle, die für die präklinische Bewertung von Augentherapien von klinischer Relevanz sind.
- Unterstützt die Kontinuität von der Entdeckung bis zur präklinischen Validierung in der Augenforschung.
- Ergänzt die Entwicklung translationaler Biomarker für Netzhaut- und Regenbogenhauterkrankungen.
Pipeline- und Workflow-Integration
Diese Isolationsmethode positioniert primäre pigmentierte Epithelzellmodelle an der Schnittstelle zwischen früher Entdeckung und präklinischer Forschung und ermöglicht hypothesengetriebene Studien sowie funktionelle Screenings.
- Entdeckungsbiochemie Ermöglicht die Hypothesenprüfung und Klärung von Signalwegen in okularen Zellsystemen.
- Screening: Liefert reproduzierbare, versuchsfertige primäre Zellen zur funktionellen Evaluierung.
- Analytik: Unterstützt die quantitative Messung der Zellviabilität, des Phänotyps und der Reaktion auf Interventionen.
- Translationale Forschung Verbindet in-vitro-Befunde mit präklinischen Modellen für regenerative und gentherapeutische Strategien.
- Unternehmensweite Wiederverwendung: Bietet eine wiederverwendbare Plattform für vielfältige Forschungs- und Entwicklungsprogramme im Bereich der Augenheilkunde.
Operative und unternehmerische Auswirkungen
- Wissenschaftlicher Wert: Erhöht die Vorhersagesicherheit und verringert mechanistische Unschärfen bei der Validierung okularer Zielstrukturen.
- Operativer Wert: Standardisiert die Isolierung primärer Zellen, um Reproduzierbarkeit und Skalierbarkeit über verschiedene Studien hinweg zu gewährleisten.
- Strategischer Wert: Verbessert die Entscheidungsfindung hinsichtlich Projektfortführung oder -abbruch und die Kapitalnutzungseffizienz in der frühen ophthalmologischen Forschung und Entwicklung.
- Portfolio-Wirkung: Ermöglicht die risikoadjustierte Priorisierung von Kandidaten für regenerative Therapien und Gentherapien.
Umsetzungsüberlegungen
- Erfordert technische Fachkenntnisse in der okularen Gewebe-Dissektion und der primären Zellkultur.
- Benötigt Zugang zu sterilen Instrumenten und Infrastruktur für die Zellkultur.
- Erfordert eine standardisierte Vorgehensweise über mehrere Arbeitsgruppen hinweg, um reproduzierbare Zellisolierung und -handhabung zu gewährleisten.
- Kann Anpassungen für verschiedene Tiermodelle oder Gewebequellen erfordern.
- Hängt von der Verfügbarkeit frischer Schweineaugen für konsistente Ergebnisse ab.
Biopharma FAQs
Organotypischen Kultur der Full-Dicke ausgewachsenen Schweinen Retina
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Primären Zellkulturen aus das retinale Pigmentepithel Maus
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Ein Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Modell mit Split Corneal Buttons
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Isolierung von IPE- und RPE-Zellen: Eine Technik zur Gewinnung von okulären Pigmentepithelzellen aus Kaninchenauge
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Isolierung von RPE- und IPE-Zellen aus Rinderauge: Ein Verfahren zur Gewinnung und Kultivierung von primären Pigmentepithelzellen von Rindern
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Isolierung, Kultur und Gentechnik von primären Pigmentepithelzellen von Säugetieren für die nicht-virale Gentherapie
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Isolierung von primären retinalen pigmentierten Epithelzellen der Maus
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Primärkultur von retinalen Pigmentepithelzellen des Schweins
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Isolierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus Meerschweinchenaugen
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Isolierung von primären retinalen Pigmentepithelzellen von Schweinen für die In-vitro-Modellierung
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Zuletzt aktualisiert: 29 August 2026