JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 Ansichten • 3:17 Min. • July 8th, 2025
Der vordere Teil des Auges wird von der Hornhaut bedeckt - einer transparenten Schicht, die die Übertragung von Lichtstrahlen ermöglicht. Die Hornhaut erstreckt sich bis in die Sklera – ein weißes Schutzgewebe um das Auge. Der Teil des Auges, der aus der Hornhaut besteht, die von einem dünnen Ring der Sklera umgeben ist, ist der Hornhautknopf.
Um den Hornhautknopf zu entfernen, legen Sie ein intaktes Schweineauge auf eine Petrischale. Entfernen Sie die Bindehaut - eine schleimige Hülle um die Sklera - zusammen mit den umgebenden extraokularen Muskeln, um Zugang zur Skleraabdeckung zu erhalten. Behandeln Sie das Auge mit einer geeigneten Desinfektionslösung, um kontaminierende Mikroorganismen von der Augenoberfläche zu entfernen.
Waschen Sie das Desinfektionsmittel mit einer Pufferlösung ab. Übertragen Sie das desinfizierte Auge in eine frische Kulturschale. Machen Sie einen Schnitt an der Sklera in der Nähe der Hornhautgrenze. Machen Sie mit dieser Öffnung einen vollständigen Umfangsschnitt, um das Auge in zwei Fragmente zu teilen.
Visualisieren Sie die Innenseite des vorderen Segments, um das Aderfell zu lokalisieren, das an der Sklera befestigt ist. Dieses Gewebe besteht aus einer pigmentierten Iris, einem ringförmigen Ziliarkörper und einem Teil der vaskulären Aderhautschicht. Lösen Sie die Uvea ab, um die Korneoskleralschicht sichtbar zu machen. Bewahren Sie den Knopf in einer sterilen Pufferlösung für weitere Assays auf.
Verwende eine sterile Pinzette, um den Augapfel in eine Petrischale zu übertragen. Entferne die Bindehaut und das Muskelgewebe um den Augapfel herum mit einer Skalpellklinge # 15 und einer Pinzette. Heben Sie dann den Augapfel vorsichtig an, während Sie den Sehnerv mit der Pinzette festhalten, und geben Sie ihn in ein Halbliter-Glas, das mit sterilem PBS gefüllt ist.
Sobald alle Augäpfel vom umgebenden Gewebe befreit sind, befördern Sie sie mit einer sterilen Pinzette in ein anderes Halbliterglas, das mit 3% Povidon-Jod in PBS gefüllt ist. Nachdem die Augäpfel eine Minute lang im Glas waren, geben Sie sie in ein drittes Glas mit sterilem PBS.
Lege einen Augapfel auf eine saubere Petrischale und halte ihn mit der Pinzette fest. Mache mit einer # 10A Skalpellklinge einen Schnitt in der Nähe der Hornhaut. Verwenden Sie eine Schere, um die Hornhaut zu entfernen, und lassen Sie etwa 3 Millimeter Sklera um sie herum. Stellen Sie sicher, dass sich das scharfe Ende der Schere im suprachoroidalen Raum befindet und die Iris nicht durchbohrt.
Halten Sie den Hornhautknopf mit einer Pinzette fest und verwenden Sie eine weitere Pinzette mit spitzem Ende, um das Aderhautgewebe vorsichtig zu trennen. Hebe dann den Hornhautknopf an, um ihn vom Rest des Augapfels zu trennen. Spülen Sie den Knopf kurz in einer 1,5%igen Lösung von Povidon-Jod in PBS. Legen Sie dann den Knopf in steriles PBS in eine 12-Well-Platte.