Mikrobioreaktorsystem aus flüssigem Marmor: Ein 3D-Kulturprotokoll für die Verkapselung von Schweineeizellen

0 Ansichten3:29 Min. • July 8th, 2025

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Bereiten Sie ein Bett aus fluoriertem Ethylenpropylen (FEP)-Pulver in einer Kulturschale vor. Geben Sie einen Tropfen Reifemedium mit Kumulus-Oozyten-Komplexen (KOK) auf das FEP-Pulver. Rollen Sie den Tropfen vorsichtig über das Pulver, um eine flüssige Murmel oder LM zu bilden. Das FEP-Pulver bildet eine hydrophobe poröse Hülle, die den Gasaustausch zwischen der inneren Flüssigkeit und der Umgebung ermöglicht.

Sammeln Sie nun die LM-Einheit und geben Sie sie in die zentrale Vertiefung einer IVF-Petrischale. Geben Sie steriles Wasser in den äußeren Ring, um die KOKs mit Feuchtigkeit zu versorgen. Inkubieren Sie dann das LM unter physiologischen Bedingungen, um die Eizellreifung zu ermöglichen.

Als nächstes entfernen Sie das verbrauchte Medium und fügen ein frisches Reifemedium hinzu. Der direkte Flüssigkeitskontakt bricht die hydrophobe FEP-Hülle auf und bricht das LM, um die COCs freizusetzen. Übertragen Sie die freigesetzten COCs in eine neue Schüssel mit einem frischen Tropfen Reifemedium und waschen Sie sie, um FEP-Partikel zu entfernen.

Nach dem Waschen die KOK und das Frischmedium auf das FEP-Pulverbett geben. Rollen Sie den Tropfen, um ihn mit Puder zu bestreichen. Übertragen Sie schließlich das LM in die IVF-Petrischale. FEP-pulverbeschichtete LMs erhalten die 3D-Struktur der Eizellen und verbessern ihre Lebensfähigkeit.

Machen Sie ein Bett aus 5 Gramm FEP-Pulver in einer 30-Millimeter-Petrischale. Verteilen Sie einen einzelnen Tropfen Reifemedium mit 3 bis 5 KOK auf dem FEP-Pulver. Drehen Sie die Platte vorsichtig in kreisenden Bewegungen, um sicherzustellen, dass die Partikel die Oberfläche des Flüssigkeitstropfens vollständig bedecken und flüssige Murmeln oder LMs bilden.

Bereiten Sie mehrere 60-Millimeter-IVF-Petrischalen vor und geben Sie 3 bis 4 Milliliter steriles Wasser in die äußeren Ringe, um eine Feuchtigkeitskammer zu schaffen. Nehmen Sie das geformte LM mit einer 1.000-Mikroliter-Pipette auf und legen Sie es in die zentrale Vertiefung. Inkubieren Sie die Murmeln vier Tage lang bei 38 Grad Celsius in einem 5%igen Kohlendioxid-Inkubator.

Um das Medium zu wechseln, tragen Sie 30 Mikroliter Reifemedium auf jedes LM auf, wodurch es sich ausbreitet. Wenn sich der Marmorinhalt aufgelöst hat, werden die aus dem Bioreaktor freigesetzten KOK in einen Tropfen frisches Reifemedium in der Petrischale überführt. Nach 3 bis 4 Wäschen im Reifemedium werden die KOK zusammen mit 30 Mikrolitern Frischmedium auf das FEP-Pulverbett überführt.

Drehen Sie die Platte vorsichtig in kreisenden Bewegungen, um sicherzustellen, dass die Pulverpartikel die Oberfläche des Flüssigkeitstropfens vollständig bedecken und ein neues LM bilden. Übertragen Sie dann das LM in die IVF-Petrischale.

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Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026