Isolierung von porzinen Aortenadothelzellen (pAEC): Eine enzymbasierte Methode zur Isolierung von Endothelzellen aus geernteten Bauchaorten von Schweinen

Die Aorta - die Hauptarterie, die sauerstoffreiches Blut vom Herzen zum Körper transportiert - besteht aus drei Schichten oder "Tuniken": einer inneren Intima, einer mittleren medial und einer äußeren Adventitia. Endothelzellen oder ECs liegen in der Intima als dünne, durchgehende Monoschicht über einer stützenden Basalmembran vor, die aus Strukturproteinen, hauptsächlich Kollagen, besteht.

Um ECs zu isolieren, beginnen Sie mit einer entnommenen Schweineaorta in einer Kulturschale. Schneiden Sie die Enden und das umgebende anhaftende Gewebe heraus, um eine Kontamination der nicht-endothelialen Zellen zu verhindern. Waschen Sie die Aorta mit einem Puffer, der Antibiotika enthält, um das mikrobielle Wachstum zu hemmen.

Führen Sie eine sterile chirurgische Naht durch die Aorta und binden Sie eines ihrer Enden zusammen, wobei die Naht im Lumen bleibt. Sichern Sie das gebundene Ende und ziehen Sie die Naht zurück, um die Aorta vollständig umzukehren. Dadurch wird die EC-haltige Intima einer enzymatischen Verdauung ausgesetzt. Behandeln Sie die Aorta mit vorgewärmter, niedrig konzentrierter Kollagenaselösung für eine optimale Enzymaktivität und inkubieren Sie.

Kollagenase baut die Kollag