Auftauen von Kaninchenembryonen: Ein Erwärmendes Verfahren zur Gewinnung kryokonservierter Kaninchenembryonen für den Embryotransfer

Das Auftauen von Embryonen ist ein Prozess, bei dem kryokonservierte gefrorene Embryonen erwärmt und rehydriert werden, um ihre biologische Aktivität wiederherzustellen.

Um kryokonservierte Kaninchenembryonen in einem versiegelten kryogenen Strohhalm aufzutauen, entfernen Sie den Strohhalm aus dem flüssigen Stickstoff. Die Embryonen mit minimalem Volumen an kryoprotektivumhaltigen Medien werden physisch durch Luft und Mediensegmente im Strohhalm isoliert. Positionieren Sie den Strohhalm kurz an der Luft, um die Freisetzung von eingeschlossenen flüssigen Stickstoffdämpfen zu erleichtern, die sonst bei wärmeren Temperaturen Schäden am Embryo verursachen.

Der rasche Anstieg von kryogenen Flüssigstickstofftemperaturen auf höhere Gefriertemperaturen initiiert die Bildung von Eiskristallen im kryogenen Strohhalm, wodurch die Gefahr besteht, dass der Embryo beschädigt wird. Wenn sich Eiskristalle zu bilden beginnen, tauchen Sie den Strohhalm sofort in ein temperaturgesteuertes Wasserbad unter leichtem Rühren, um ihn gleichmäßig aufzutauen. Dieser Schritt entfernt die Eiskristalle und schützt die Embryonen vor Schäden durch die Eiskristalle.

Entfernen Sie den Strohhalmstopfen. Schneiden Sie das versiegelte Ende des Strohhalms ab; Bringen Sie einen Mikrodispenser an, um den Inhalt in eine Kulturplatte mit saccharosehaltigem Medium abzugeben. Das Medium hilft, Kryoprotektiva aus den Embryonen zu entfernen; Die Saccharose verhindert ein übermäßiges Anschwellen der Embryonen und stellt ihre physiologische Umgebung während der Rehydrierung wieder her.

Übertragen Sie die Embryonen in eine Platte mit frischem Medium, um die Kryoprotektiva vollständig zu entfernen und eine vollständige Rehydrierung zu gewährleisten. Die aufgetauten Embryonen sind bereit für den Embryotransfer.

Um die Embryonen für einen Transfer aufzutauen, legen Sie die Embryonen 20 bis 30 Sekunden lang horizontal 10 Zentimeter vom flüssigen Stickstoffdampf entfernt. Wenn der Kristallisationsprozess im Inneren des Ministrohs beginnt, tauchen Sie den Strohhalm für 10 bis 15 Sekunden in ein 25 Grad Celsius heißes Wasserbad. Entfernen Sie sofort den Strohhalm und die Wattestopfen und verwenden Sie einen gekoppelten Mikrospender, um den Inhalt des Ministrohs in eine Platte mit 25 Grad Celsius Basismedium auszustoßen, das mit 0,33 molaren Saccharoselösung versetzt ist, in der die Embryonen 5 Minuten lang verbleiben müssen. Übertragen Sie dann die Embryonen für eine weitere 5-minütige Inkubation auf eine Platte mit frischem Basismedium.