Embryotransfer in Kaninchen: ein Verfahren für den laparoskopiegesteuerten Transfer von Embryonen in den Eileiter eines ovulierenden weiblichen Kaninchenmodells

Um den Embryotransfer durchzuführen, nehmen Sie ein unbefruchtetes Kaninchen. Injizieren Sie dem Kaninchen intramuskulär ein synthetisches Analogon des Gonadotropin-Releasing-Hormons. Dieses Verfahren induziert den Eisprung und ermöglicht es dem Kaninchen, eine Pseudoschwangerschaft zu zeigen - ein Zustand, bei dem der Körper schwangerschaftsähnliche Symptome zeigt, ohne einen lebensfähigen Fötus zu haben, was die Überlebenschancen des Embryos in den folgenden Schritten erhöht.

Betäuben Sie das Kaninchen und legen Sie es in Rückenlage, in eine geneigte Position, mit den Füßen über dem Kopf. Diese Position verschiebt die Bauchorgane nach oben, wodurch ein ausreichender Abstand zu den Fortpflanzungsorganen gewährleistet wird. Machen Sie eine Öffnung im vorderen Teil der Bauchregion. Verwenden Sie diesen Bereich, um eine endoskopische Kamera in die Bauchhöhle einzuführen, um das Fortpflanzungssystem sichtbar zu machen.

Nehmen Sie nun eine Spritzen-Katheter-Anordnung, die lebensfähige Embryonen enthält. Führen Sie die Nadel in der Nähe des Eileiters ein – einem Kanal, der den Embryo in Richtung Gebärmutter führt. Schieben Sie den Katheter durch das Ende des trichterförmigen Hohlraums oder Infundibulums bis zur Ampulle – einer langen röhrenförmigen Position des Eileiters.

Lassen Sie die Embryonen in die Ampulle frei. Ziehen Sie den Katheter zurück und entfernen Sie die Kamera. Versiegeln Sie die Inzisionsstelle. Bringen Sie das Kaninchen in seinen Käfig und überwachen Sie es. Die Embryonen wandern aus der Ampullenregion in Richtung des Gebärmutterhorns – dem Teil der Gebärmutter, in dem die Einnistung stattfindet. Gesunde Embryonen werden implantiert, was schließlich zu einer erfolgreichen Schwangerschaft führt.

Spülen Sie am Tag des Transfers die frischen oder aufgetauten Embryonen in 37 Grad Celsius niedrigem Basismedium unter einem Stereomikroskop und legen Sie einen entsprechend konfigurierten 17-Gauge-Epiduralkatheter an eine 1-Milliliter-Spritze. Aspirieren Sie einen Zentimeter Basismedium in den Katheter, gefolgt von einer kleinen Luftblase. Aspirieren Sie dann 5 bis 7 Embryonen und 10 Mikroliter Basismedium, gefolgt von einer weiteren kleinen Luftblase in einem letzten Zentimeter Basismedium.

Sobald die Embryonen geladen sind, setzen Sie ein betäubtes Empfängerkaninchen in einem Käfig in einer Warmphase und tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf. Nachdem Sie festgestellt haben, dass Sie nicht auf den Pedalreflex reagieren, rasieren Sie das Fell vom Bauchbauch, reinigen Sie den Operationsbereich mit Chlorhexidingluconat-Seife und entfernen Sie alle verbleibenden Haare.

Decken Sie den Bereich mit einem sterilen Tuch mit einem Loch für den Operationsbereich ab und führen Sie einen endoskopischen Trokar 5 Zentimeter in die Bauchhöhle ein, 2 Zentimeter kaudal zum Xiphoidfortsatz, und verwenden Sie einen druckregulierenden mechanischen Insufflator, um die Bauchhöhle aufzublasen.

Führen Sie die Endoskopkamera durch den endoskopischen Trokar ein und führen Sie die 17-Gauge-Epiduralnadel 2 bis 3 Zentimeter vom Infundibulum entfernt in die Leistenregion ein. Führen Sie den geladenen Katheter durch die Epiduralnadel in den Bauch ein und führen Sie 1 bis 2 Zentimeter des Epiduralkatheters durch das Infundibulum in der Ampulle ein.

Drücken Sie vorsichtig auf den Katheterkolben, um die Embryonen in den Eileiter freizusetzen. Beide Luftblasen müssen aus dem Katheter austreten. Entfernen Sie den Katheter unmittelbar nach der Freisetzung der Embryonen und aspirieren und geben Sie das restliche Medium frei, um das Fehlen der Embryonen zu bestätigen.

Nachdem Sie einen erfolgreichen Transfer der Embryonen bestätigt haben, entfernen Sie die Epiduralnadel und die Endoskopkamera und geben Sie das abdominale Kohlendioxid durch den endoskopischen Trokar ab. Reinigen Sie den Trokarschnitt mit Chlorhexidinlösung und verschließen Sie die Wunde mit einem mikronisierten Aluminium- und einem Kunststoffverband. Behandeln Sie dann das Tier mit den entsprechenden Antibiotika und Analgetika und überwachen Sie das Tier bis zur vollständigen Genesung.