Nanoblade-basierte Verabreichung von Nukleinsäurefracht: Eine Technik zur Verabreichung des Cas9-sgRNA-Komplexes an Zielzellen über virusähnliche Partikel

Nanoblades sind synthetische virusähnliche Partikel ohne das verkapselte virale Erbgut, was sie zu geeigneten Trägern für fremde Fracht in die Wirtszellen macht. Diese Nanoklingen werden aus dem retroviralen Kern des Maus-Leukämievirus hergestellt, der von der Lipid-Doppelschichtmembran umgeben ist, die von den eukaryotischen Produzentenzellen abgeleitet wird, die zum Zusammenbau von Nanoklingen in vitro verwendet werden.

Der Kern enthält das Cas9-Enzym, das mit der sgRNA komplexiert ist, die für die Zielgenomsequenz spezifisch ist. Kernproteine sind von den Hüllproteinen umgeben, die eine Transmembrandomäne oder TM enthalten, die durch die Lipiddoppelschicht verläuft. Das TM bindet an eine extrazelluläre Glykoprotein-Oberflächendomäne oder SU, die aus der Doppelschichtschicht herausragt.

Um Nanoblades für die Geneditierung zu verwenden, nehmen Sie eine Kultur mit adhärenten Zielzellen und ergänzen Sie sie mit der Nanoblade-Lösung. In der Kultur erkennt das hervorstehende SU einer Nanoklinge den entsprechenden Rezeptor auf der Oberfläche der Wirtszelle und bindet an diesen. Dies führt zu Änderungen in der SU-Domänenstruktur, die die Freigabe erleichtern.

Diese Veränderungen lösen d