Agrobacterium-vermittelte genetische Transformation: Eine Methode zur genetischen Transformation des Reisgenoms mittels gentechnisch verändertem Agrobacterium tumefaciens

Agrobacterium tumefaciens, ein pflanzenpathogenes Bakterium, kann gentechnisch verändert werden, indem ein künstlich hergestelltes Ti-Plasmid eingeführt wird, das ein Gen trägt, das für seine Transfer-DNA oder T-DNA-Region von Interesse ist, und ein Helferplasmid, das die Virulenz- oder Vir-Gene für die Übertragung der T-DNA in Pflanzenzellen trägt.

Für die durch

Agrobacterium vermittelte genetische Transformation beginnen Sie mit einem jungen Reisblütenstand und schneiden Sie ihn in kleine Stücke. Übertragen Sie die Stecklinge auf ein Wachstumsmedium und inkubieren Sie, um das Wachstum der Stecklinge zu einer undifferenzierten Zellmasse, der sogenannten Kallus, zu erleichtern.

Übertragen Sie nun den Kallus in ein Agrobacterium-Infiltrationsmedium, das Acetosyringon enthält - einen Chemolockstoff für Agrobacterium. Als nächstes fügen Sie dem Medium eine Kultur mit gentechnisch verändertem Agrobacterium hinzu und inkubieren Sie kurz.

Die Acetosyringon-Moleküle aktivieren das Zellrezeptorprotein - VirA - auf der Agrobacterium-Membran, das die Phosphorylierung eines transkriptionellen Aktivatorproteins - VirG - weiter vermittelt. Phosphoryliertes VirG bewegt sich in Richtung des Helfe