JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:23 Min. • July 8th, 2025
Um Plasmide durch Nukleofektion in Sporozoitenkerne zu bringen, beginnen Sie mit einer Suspension isolierter, lebensfähiger Sporozoiten - bewegliches, infektiöses Stadium der Parasiten - in Puffer. Sporozoiten sind schlanke Zellen, die von einer äußeren Plasmamembran und einem darunter liegenden inneren Membrankomplex umgeben sind, der aus einer Reihe von abgeflachten Vesikeln und Proteinen besteht, die für die strukturelle Stabilität und Beweglichkeit entscheidend sind.
Zentrifugieren Sie die Suspension, um die Sporozoiten zu pelletieren. Resuspendieren Sie das Sporozoit-Pellet in einem geeigneten Volumen nukleärer Transfektionspuffer, ergänzt mit fluoreszierenden Protein-kodierenden Plasmiden. Der nukleare Transfektionspuffer mit hoher Pufferkapazität und Ionenstärke gewährleistet eine effiziente Transfektion bei gleichzeitiger Beibehaltung der Sporozoitenfunktionalität.
Die Suspension wird in eine nukleare Transfektionsküvette überführt. Legen Sie die Küvette in die Halterung eines Nukleofektionsgeräts. Führen Sie das entsprechende Nukleofektionsprogramm aus.
Während der Nukleofektion stören spezifisch applizierte kurze Hochspannungsimpulse zusammen mit Pufferbestandteilen vorüb
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